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• W2022333379 abstract "Bacillus anthracis produces two toxins composed of three proteins. Genetic tools were constructed to study the regulation of toxin synthesis. They include transcriptional fusions with various reporter genes, in replicative and integrative vectors. The reporter gene xylE, encoding catechol 2,3-dioxygenase, may be valuable for screening of strong promoters, as expression of the gene can be visualized directly and the enzyme is not toxic for the cells. However, xylE did not appear suitable for quantitative studies of regulation in B. anthracis. Therefore, transcriptional fusions between a lacZ reporter gene and the toxin genes were constructed. Experiments with a multicopy plasmid in trans suggested that the transcriptional activator(s) of the toxin genes were not titrated. B. anthracis strains, which contain pXO1 carrying multiple copies of fusions, were analysed. Expression of the reporter gene was proportional to the fusion copy number. Indeed, single integration of a suicide plasmid can be distinguished from multiple integration according to the level of resistance to an appropriate antibiotic. Finally, recombination in B. anthracis was found to be very efficient (approximately 10−2 recombinants per transconjugant cell). Bacillus anthracis produit deux toxines, composées de trois protéines. Des outils génétiques ont été conçus afin de permettre l'étude de la régulation de la synthèse de ces trois composants. Des fusions transcriptionnelles entre les régions régulatrices des trois gènes correspondants et différents gènes rapporteurs ont été construites sur des vecteurs, soit réplicatifs, soit intégratifs chez B. anthracis. Le gène xylE, qui code une catéchol-2,3-désoxygénase, devrait permettre le criblage de promoteurs forts, du fait que l'expression de ce gène peut être visualisée directement sur colonie et que l'enzyme n'est pas toxique pour les cellules. Par contre, xylE n'est pas adaptéà des études quantitatives de régulation chez B. anthracis. Pour ces raisons, les fusions transcriptionnelles ont été réalisées avec le gène lacZ. L'utilisation de plasmides à haut nombre de copies, en trans, a permis de montrer qu'il n'y avait pas titrage du ou des activateurs transcriptionnels des gènes des toxines. De plus, le niveau d'expression du gène lacZ est proportionnel au nombre de copies des fusions intégrées sur le plasmide pXO1. Les intégrations simples ou multiples peuvent être différentiées, par le niveau de résistance à un antibiotique approprié. Enfin, la recombinaison semble être un processus très efficace chez B. anthracis, avec une fréquence d'environ 10−2 clone recombinant par bactérie transconjugante." @default.
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