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• W1187796144 abstract "Die bakterielle Resistenzentwicklung stellt in der Humanmedizin ein zunehmendes Problem dar. In vivo-Modelle sind fur die Untersuchung dieser Resistenzentwicklung von Mikroorganismen notwendig, da hier die Situation in einem Patienten simuliert werden kann. Mit Hilfe eines Mini-Tn10-Transposon-Systems wurde ein E. coli mit green fluorescent protein (gfp), das unter der Kontrolle des araB-Promotors steht, und einer Kanamycin-Resistenzkassette chromosomal markiert. Der daraus hervorgegangene Klon E. coli-57 zeigte im Vergleich zu seinem Wildtyp E. coli-4 keine phanotypische Veranderung. Der Integrationsort der Markierung in das Genom von E. coli-57 konnte nicht festgestellt werden. Im zweiten Teil der Arbeit sollte die Resistenzentwicklung des E. coli-57 gegen Fluorchinolone in vivo untersucht werden. Hierfur wurde der Rattendarm mit dem E. coli-57 kolonisiert und dieser war ohne Antibiose kulturell uber sechs Monate lang stabil nachweisbar. Die orale Gabe des Antibiotikums Ciprofloxacin uber drei Tage verursachte bei E. coli-57 einen Verlust des gfp-Gens. Rep-PCR und die Ergebnisse des Southern Blot zeigten, dass die entstandenen Klone mit E. coli-57 verwandt sind. Die Klone zeigten im Vergleich zu E. coli-57 keine Veranderung der Minimalen Hemmkonzentration gegen Ciprofloxacin. Multiresistenz ist das Ergebnis des Zusammenwirkens von spezifischen Mechanismen und Uptake-/Efflux-Vorgangen durch multi drug resistance (MDR)-Transporter. Bisher sind wenige Substanzen bekannt, die als so genannte Induktoren eine Anderung der Expression von MDR-Transportsystemen verursachen (z. B. Azetylsalizylsaure). Aufgrund dessen war ein weiteres Ziel der Arbeit die systematische Identifikation pharmakologischer Substanzen als Co-Medikation von Antibiotika, die Expressionssteigerungen von spezifischen MDR-Transportern auslosen. Fur das Screening potentieller Induktoren wurden Reporterstamme generiert, die einen Vektor mit dem gfp-Reportergen unter der Kontrolle von jeweils einem Promotor der sieben bekannten Fluorchinolon-Pumpen tragen. Neben Azetylsalizylsaure wurden Ibuprofen, Ketoprofen, Paracetamol und die jeweiligen Losungsmittel der Substanzen (100 %iger Ethanol oder 70 %iger Ethanol) auf induktive Wirkung hin untersucht. Azetylsalizylsaure, Paracetamol und 70 %iger Ethanol zeigten einen induktiven Effekt sowohl auf die Transkription von acrAB als auch auf die marRA-Transkription. Bei 100 %igem Ethanol zeigte sich ein induktiver Effekt auf die marRA-Transkription, jedoch kein induktiver Effekt auf die acrAB-Transkription. Eine Steigerung der Expression von acrD war bei allen funf Substanzen zu beobachten. Eine Induktion des acrEF-Promotors oder des norE-Promotors war bei keiner der genannten Substanzen zu erkennen. Durch Salizylat kann auch die Virulenz und Adharenz von Keimen verandert werden. Um die Auswirkungen von unterschiedlichen Salizylatkonzentrationen (5 mM�20 mM) auf E. coli zu untersuchen sollte die Adharenz in der Zellkultur untersucht werden. Auserdem sollten die Expressionsanderungen von Adharenz (sfaD/E, motB)und Virulenzgenen (hlyE) mittels Real-Time-PCR (RT-PCR) untersucht werden. Die bei dieser Untersuchung verwendeten E. coli-Stammen E. coli 1173 und E. coli 1267 zeigten bei einer Verwandtschaft unterschiedliche MHK (4 mg/l versus 256 mg/l) gegenuber Ciprofloxacin. Eine Erhohung der Salizylatkonzentration verursachte bei E. coli 1173 eine Abnahme und bei E. coli 1267 keine Abnahme der Adharenz. Es konnte keine Veranderung in der Transkription der Gene hlyE (Hamolysin), sfaD/E (S-Fimbrien) und motB (Motilitat) in Abhangigkeit von der Salizylatkonzentration beobachtet werden." @default.
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