FRINK Linked Data Fragments server

Matches in SemOpenAlex for { <https://semopenalex.org/work/W125468218> ?p ?o ?g. }

• W125468218 abstract "El PCI es una proteina de 39 aminoacidos con una estructura globular central de 27 residuos y dos colas, N- terminal y C- terminal. La parte globular de la proteina presenta una helice 310, como unica estructura secundaria regular, asi como 4 bucles (loops) y esta estabilizada por tres puentes disulfuro formados por las cisteinas C8- C27, C12- C24 y C18- C34. La presencia de estos puentes disulfuro nos permite estudiar el replegamiento del PCI a traves de la captura de los intermediarios que se forman en el proceso de plegamiento a partir de la proteina reducida. Esto permite conocer el numero de intermediarios dependientes de disulfuro, su diversidad, su estructura y sus propiedades, proporcionandonos informacion sobre el mecanismo de plegamiento.En una primera fase del presente trabajo, hemos estudiado el aislamiento y la purificacion de los intermediarios con tres puentes disulfuro (denominados species) a partir de la mezcla de intermediarios que se obtiene tras efectuar el replegamiento del PCI a partir de PCI purificado o a partir de cultivos de E. Coli que expresan PCI. Asi mismo, hemos realizado una caracterizacion estructural de los intermediarios aislados en forma pura, se han determinado sus constantes de inhibicion, estas son del orden mM (unas 1000 veces superiores a la estimada para el PCI nativo). Tambien se ha determinado cuales son las cisteinas implicadas en cada uno de los puentes disulfuro de la estructura de tales especies mediante digestion proteolitica y mediante reduccion quimica parcial de un puente disulfuro. Finalmente se ha realizado un analisis conformacional por estudios de Dicroismo Circular y Resonancia Magnetica Nuclear, tecnicas que nos han permitido observar que tales intermediarios no presentan una estructura mayoritaria definida.En una segunda fase, hemos estudiado la ultima etapa del camino de plegamiento del PCI, etapa donde las especies 'scrambled rompen y vuelven a formar sus puentes disulfuro para dar lugar a la estructura nativa. Con este fin se ha estudiado la estabilidad relativa de estos intermediarios frente a agentes desnaturalizantes y se han llevado a cabo experimentos cineticos de su evolucion a estructura nativa. Estos experimentos han probado que el plegamiento del PCI no tiene lugar a traves de una via unica sino que se dan multiples vias paralelas. Se han observado que los intermediarios que son mas estables frente a agentes desnaturalizantes son los que presentan una evolucion mas lenta hacia la forma nativa.Finalmente en una tercera fase, se ha estudiado la influencia de agentes redox en la produccion de PCI recombinante y en otras proteinas relacionadas. Se observo que la expresion de estos en E. Coli, en forma secretada al medio, se acumulaba gran parte de la proteina en forma de intermediarios tipo scrambled. Se ha determinado que la forma mas eficiente para convertir estas especies en proteina nativa, consiste en la adicion al medio tras el cultivo de agentes redox para catalizar el proceso de reshuffling. De esta forma se consiguen importantes mejoras en el rendimiento de la produccion.Potato carboxipeptidase inhibitor (PCI) contains 39 amino acids. 27 residue composed the central globular structure and the rest composed the queue N- terminal and C- terminal. The globular part of the protein presents an helix 310, as the only secondary structure regular, and 4 loops. The protein is stabilised by tree disulfide bridges composed by the cystines: C8-C27, C12- C24 I C18- C34.The presents of this disulfide bridges let us to study the refolding of PCI by trapping the intermediates formed during the folding pathway of the reduced protein. This process let us know the number of intermediates disulfide dependents, his diversity, his structure and his proprieties, giving us information of the folding pathway.In a first stage of this work, we studied how to isolate and purification the intermediates with tree disulfide bridges (denominated spices) by the intermediates obtained from the refolding of PCI, from the PCI purification or from E.Coli cultives. With the pure intermediates we have done a structural characterisation and we have defined their inhibitor constants. Also we defined which are the cystines implicated in each disulfide bridge by proteolysis and by partial chemical reduction to one disulfide bridge. Finaly we have done a conformacional analysis by Circular Dicroism and Nuclear Magnetic Resonance. This techniques reveal us that the intermediates don't have a main structure defined.In a second stage, we have been studied the last step of the folding pathway from PCI. During this step the scrambled spices break and refold their disulfide bridges to give the native structure. We studied the relative stability of the intermediates in front of disnatured agents and kinetics experiments of their evolution a native structure. This experiments reveal that the folding of the PCI isn't by one path, it is by multiple parallel pathways. We have seen that the most stable intermediates in front of disnature agents are the most slow to native structure.Finally in a third stage, we studied the effect of redox agents in the production of recombinant PCI and other relation proteins. We have seen that most protein was accumulate in intermediates type scrambled during the E.Coli expression. We determined that the most efficient conversion to the native form is by the addition of agents redox in the medium after the grow, this agents catalite the reshuffling process. By this form we have good improve in the production rendiment." @default.
• W125468218 created "2016-06-24" @default.
• W125468218 creator A5027739065 @default.
• W125468218 date "2001-03-16" @default.
• W125468218 modified "2023-09-24" @default.
• W125468218 title "Estudios sobre el mecanismo de plegamiento de proteinas ricas en disulfuros. Estudios sobre el inhibidor de carboxipeptidasa de patata (PCI)" @default.
• W125468218 hasPublicationYear "2001" @default.
• W125468218 type Work @default.
• W125468218 sameAs 125468218 @default.
• W125468218 citedByCount "0" @default.
• W125468218 crossrefType "journal-article" @default.
• W125468218 hasAuthorship W125468218A5027739065 @default.
• W125468218 hasConcept C118552586 @default.
• W125468218 hasConcept C138885662 @default.
• W125468218 hasConcept C15708023 @default.
• W125468218 hasConcept C45393284 @default.
• W125468218 hasConcept C500558357 @default.
• W125468218 hasConcept C71924100 @default.
• W125468218 hasConceptScore W125468218C118552586 @default.
• W125468218 hasConceptScore W125468218C138885662 @default.
• W125468218 hasConceptScore W125468218C15708023 @default.
• W125468218 hasConceptScore W125468218C45393284 @default.
• W125468218 hasConceptScore W125468218C500558357 @default.
• W125468218 hasConceptScore W125468218C71924100 @default.
• W125468218 hasLocation W1254682181 @default.
• W125468218 hasOpenAccess W125468218 @default.
• W125468218 hasPrimaryLocation W1254682181 @default.
• W125468218 isParatext "false" @default.
• W125468218 isRetracted "false" @default.
• W125468218 magId "125468218" @default.
• W125468218 workType "article" @default.