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- W137478196 abstract "AH13を含む種々の移植性腹水肝癌細胞株で一様に観察されたPP1αmRNAの発現亢進とその癌性変異との関連を明らかにすべく、ラットPP1α遺伝子の転写調節機構の解析を試みた。1. PP1αmRNAの高発現は、その安定性の上昇によるものではなく、転写速度の上昇によることが明らかになった。2. ラットゲノムライブラリーよりPP1α遺伝子5'-上流域をクローニングした。3. プロモーター領域付近の塩基配列を、翻訳開始点から上流約1.8kbp、下流約0.4kbpを決定した。翻訳開始点上流町300bpは、非常に高いGC含量の配列を有し、TATA box、CAAT boxは存在しなかった。また、第一エクソンは18アミノ酸残基をコードする領域が含まれていた。4. 複数の転写開始点が、高GC領域内に存在した。5. NIH3T3マウス線維芽細胞株および正常肝細胞では、高GC領域のみがPP1αの転写に影響を及ぼしていた。これに対し移植性腹水肝癌細胞株AH13では、高GC領域のみならず、-0.5 - -0.8kbpの領域が転写活性化にかかわっていることが明らかとなった。6. ゲルシフトアッセイでは、高GC領域に対して、正常肝細胞に比べ、検討した5種の移植性腹水肝癌細胞株のいずれもSp1の結合量が増加していた。また、AH13において転写活性化に関与していた -742 - -862kbpの約0.3kbpの領域のうち、-742 - -862のフラグメントに対し、正常肝細胞核抽出液ではシフトバンドは見られなかったが、AH13核抽出液では、強いシフトバンドが見られた。このシフトバンドはAH7974F核抽出液でも観察されたが、AH109A、AH225Aの核抽出液では非常に弱く、AH130核抽出液ではまったく見られなかった。7. -742 - -862のフラグメントに対してAH13核抽出液で検出されたシフトバンドは、39、35、21kDaの少なくとも、3つの因子を結合することによるものであることが明らかとなった。以上の結果より、種々の移植性腹水肝癌細胞株においてPP1αmRNA発現上昇するメカニズムは、検討したすべての細胞においてSp1結合量が増加すること、およびこれに加えてAH13、AH7974Fでは、正常状態では発現、またはDNA結合活性が抑制されている何らかの因子が活性化していることの両機構によるものであることが明らかとなった。%%%%112p.%%%%Hokkaido University（北海道大学）. 博士(理学)" @default.
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