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- W1504657930 abstract "In dieser Arbeit wurden die folgenden Aspekte der Genetik und Biosynthese des Makrolids Midecamycin ausgearbeitet, um die Mechanismen der Makrolidzuckersynthese zu klaren und Handwerkszeuge fur die Herstellung hybrider Makrolide zu liefern. Durch sequentielles Screening einer genomischen DNA-Bank im Cosmidvektor pKU206 durch zwei homologe PCR-amplifizierte Genproben wurden zwei Regionen von insgesamt ca. 75 kb DNA isoliert, die die gewunschten Anteile des Midecamycin (mid) Genclusters enthielten. Ca. 10 kb DNA aus Cosmid Smyc-LC1 und ca. 7 kb DNA aus Smyc-LC3 wurden komplett sequenziert. Die ubrigen Regionen wurden durch partielle Sequenzierung charakterisiert, um weitere Informationen uber Struktur und Genverteilung zu erhalten. Unter den Genen wurden 10 komplette und 14 unvollstandige Leserahmen identifiziert, die fur die Midecamycin-Biosynthese notwendig sind. Die Region der Mycarose-Biosynthesegene wurde auf Smyc-LC1 gefunden. Das komplette Set der Gene fur Biosynthese und Transfer der Mycaminose wurde kloniert. Die Organisation des mid Genclusters ist ahnlich wie in andern Makroliden zu beiden Seiten der zentralen PKS Gene mit zwei gemischten Gruppen von Zucker-, Acylierungs-, Resistenz- und Regulatorgenen strukturiert. Die Genen, midC, midH, midK und midI, wurden durch heterologe Expression charakterisiert. MidC und MidH wurden als losliche Proteine in E. coli uberproduziert, jeweils in nativer und His-tag fusionierter Primarstruktur. Die ebenfalls loslichen His-tag Proteine MidK und MidI wurden nur in geringer Menge gebildet und uber Westernblot nachgewiesen. Um die postulierten Funktionen der MidH (3,4-Isomerase) und MidC (3-Aminotransferase) nachzuweisen, wurden die Produkte eines gekoppelten Enzymtests zur Umsetzung von dTDP-D-Glucose mit RmlB (4,6-Dehydratase), MidH und MidC mittles HPLC und LC-MS Techniken ausgewertet. Es wurde bestatigt, das das MidC Protein verantwortlich ist fur die Transaminierungsreaktion bei der Bildung des dTDP-Amino-6-Deoxy-D-Glucose." @default.
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