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• W1519340507 abstract "Agrobacterium tumefaciens es una bacteria fitopatogena causante de tumores en el cuello y raices de muchas especies vegetales de interes economico. En los viveros e invernaderos es donde mas danos produce, al aparecer episodios epidemicos que pueden impedir la comercializacion de producciones enteras, porque las plantas afectadas por esta enfermedad no pueden ser comercializadas. Los estudios epidemiologicos y de dinamica de poblaciones del patogeno son poco abundantes y han incidido en aspectos del desarrollo y mantenimiento de la enfermedad producida por la bacteria. Aunque se ha senalado el predominio de cepas no patogenas frente a patogenas en ambientes en los que las cepas productoras de la enfermedad verian favorecido su mantenimiento, apenas se ha investigado la perdida del poder patogeno en aislados de tumores.Por tanto, en esta memoria se ha pretendido ampliar el conocimiento sobre la aparicion de cepas no patogenas a partir de cepas patogenas en tumores de diversas especies vegetales, huespedes habituales y no habituales. El objetivo era comprobar si este fenomeno se presenta en la mayoria de cepas de A. tumefaciens, y si existen interacciones con plantas o de otro tipo que favorezcan su aparicion. En primer lugar, se ha puesto a punto un metodo de identificacion de cepas individuales de A. tumefaciens, por medio de un sistema de RAPDs, que emplea iniciadores inespecificos, y que se ha comprobado que es eficaz para diferenciar entre cepas del genero Agrobacterium sp.En segundo lugar, se han llevado a cabo varios experimentos de inoculacion de diversos huespedes vegetales y, de los tumores producidos, se han aislado colonias de las que se ha estudiado el fenotipo patogeno, para comprobar la frecuencia de aparicion de este fenomeno y estudiar los cambios que a nivel molecular habian sufrido. Tambien se han llevado a cabo experimentos in vitro, mediante siembras sucesivas en un medio general, para ver si la perdida del fenotipo patogeno se produce de forma espontanea.El sistema de identificacion mediante RAPDs ha permitido comprobar que, en el analisis de mas de 5.000 colonias no patogenas procedentes de los aislamientos realizados en los tumores, solo siete de estas colonias se correspondia con la que previamente se habia inoculado en alguno de los huespedes. El resto eran cepas de Agrobacterium no patogenas de las que se desconoce su origen. Los resultados de este trabajo muestran por tanto, que el fenomeno de la perdida del poder patogeno se produce, en las condiciones y cepas estudiadas, de forma muy escasa.La caracterizacion molecular de los mutantes ha mostrado que 6 de 7 presentan cambios en su plasmido Ti. Entre ellos, inserciones de elementos transponibles en genes de virulencia o mutaciones puntuales. El caso mas llamativo es el de dos mutantes que presentan grandes cambios en su plasmido Ti, con un tamano doble del de la cepa salvaje. El resto de mutantes presenta variaciones en el tamano o numero de plasmidos respecto a las cepas parentales. Los cambios ocurridos parecen implicar grandes reorganizaciones en el genoma de los mutantes, no solo a nivel del plasmido Ti.__________________________________________________________________________________________________SUMMARYAgrobacterium tumefaciens is the agent of crown gall in many plants of economic interest. The losses are important in greenhouses and nurseries, because of outbreaks that do not allow the marketing of entire productions. Studies on epidemiology are scarce, and they have focused on several aspects about the spread and maintenance of the disease. Although it has been noticed the predominance of non pathogenic strains against pathogenic in environments where the tumorigenic strains would be favored, few studies have been developed on the loss of pathogenicity.The goal was to increase the knowledge about the appearance of nonpathogenic strains from pathogenic bacteria in tumors produced in different plant species, to see whether this phenomenon occurs in the majority of A. tumefaciens strains, and if they exist interactions with plants that could increase these changes. An identification system to distinguish strains of A. tumefaciens by a RAPD procedure has been set up, and it has proved its validity.Several inoculation experiments on different hosts have been performed, and from the tumors produced, colonies were isolated and analyzed to see the phenotype pathogen, to determine the frequency of this phenomenon and study the changes they could have undergone. In vitro experiments of successive incubations in a general medium have been performed as well, to examine if this loss of pathogenicity takes place spontaneously.The identification system by RAPDs has established that among more than 5.000 nonpathogenic colonies isolated from the tumors, only seven correlated with the strains previously inoculated in the hosts.The results obtained in this work have shown that the loss of pathogenicity takes place, in the conditions and with the strains studied, very scarcely.The molecular characterization of the mutants has shown that 6 out of 7 found have changes in the Ti plasmid. Among them, the insertion of DNA sequences (IS) into virulence genes or point mutations. In two of the mutants, the alterations have affected the Ti plasmid that it duplicates the size of the parental strain. The changes seem to be due to rearrangements in the genome of the mutants, and in the plasmid." @default.
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