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• W1547899618 abstract "En S. cerevisiae, al igual que en celulas de mamifero, el principal control durante el ciclo celular esta situado al final de la fase G1, en un punto llamado START (Cross 1995). En START se coordina el crecimiento con la division celular la celula solo entrara en un nuevo ciclo celular si ha alcanzado un tamano critico y las condiciones medioambientales son apropiadas. Un proceso clave en START es la activacion de un programa de transcripcion especifico de la fase G1 tardia. Dos factores de transcripcion similares, SBF y MBF, son los responsables de esta regulacion de la expresion genica. Con el objeto de un mejor conocimiento de los mecanismos moleculares que controlan START y la transicion G1/S en el ciclo celular, se inicio una estrategia de rastreo genetico disenada para identificar genes cuya mutacion sea letal en combinacion con una delecion en el gen SWI4 (Igual et al. 1996). De dicho rastreo se aislaron 14 mutantes rsf (requiring SWI four). La caracterizacion preliminar de estos mutantes puso de manifiesto que Swi4p interviene en muchas y variadas funciones ademas, e independientemente, de la regulacion de las ciclinas CLN1,2 (Igual et al. 1997). Durante el presente trabajo se han caracterizado dos de estos mutantes rsf. En el caso del mutante clb5swi4, se ha demostrado la conexion funcional de la ciclina Clb5p, de la ruta PKC y del factor de transcripcion SBF en procesos de metabolismo del DNA y en el mantenimiento de la integridad celular. Tambien se ha demostrado que la inactivacion del gen CLB5 provoca defectos en la integridad celular siendo un mutante clb5 sensible al tratamiento con SDS, CFW, latrunculina B, cafeina o a la digestion con enzimas que degradan la pared celular como la zimoliasa. Estos resultados indican que la ciclina Clb5p esta implicada en el metabolismo de la pared celular y en el mantenimiento de la integridad celular. Por otro lado, se ha descrito que el gen ROT1, al cual se le habia relacionado con la ruta PKC por estudios de interacciones geneticas, participa en la salida de mitosis y en citoquinesis. Se ha demostrado que Rot1p presenta funciones antagonicas a la ciclina Clb2p en el control de la salida de mitosis y participa en la regulacion del citoesqueleto de actina. En el segundo caso, la caracterizacion del mutante msn5swi4 realizada durante los ultimos anos ha permitido identificar una relacion funcional entre el factor de transcripcion de ciclo celular SBF y la carioferina Msn5p. Tambien se ha demostrado que Msn5p participa en el control de Start regulando la transcripcion dependiente de SBF y no la de MBF. Msn5p es una carioferina que se requiere para la exportacion de Swi6p al citoplasma en la transicion G2/M del ciclo celular. Este mecanismo de exportacion de Swi6p al citosol es esencial para su funcionalidad y es un proceso de regulacion que actua en cada ciclo celular. Nuestros resultados son un buen ejemplo de la importancia de la regulacion espacial en el control del ciclo celular. En el caso de Swi6p el concepto de regulacion espacial va mas alla en el sentido de que un interruptor funcional de la proteina se acopla a cambios en la localizacion subcelular. En el curso del trabajo se observaron algunas diferencias funcionales entre las ciclinas Cln1p y Cln2p. Estas ciclinas son proteinas muy similares, su niveles se regulan por los mismos mecanismos moleculares y la actividad quinasa asociada fluctua con la misma periodicidad. Ademas, numerosos estudios han puesto de manifiesto el solapamiento funcional entre estas dos ciclinas lo cual ha conducido a considerarlas como proteinas equivalentes. Sin embargo, diversas observaciones nos han permitido esclarecer el diferente papel que para la celula de levadura juegan Cln1p y Cln2p en la progresion en la transicion G1/S del ciclo celular, concretamente en el proceso de gemacion.-------------------------------------------------------------------------------------------------- SUMARY In S. cerevisiae, similarly with mammals cells, the major control point during cell cycle appears at late G1 phase, in a process called Start. In that moment cells decide to initiate or not a new round of cell division. In Start, when enviromental conditions are appropiate and cells reach a critical size, different processes begin such as DNA replication, bud emergence and spindle pole body duplication. One of the mechanisms contributing to cell cycle regulation is the control of transcription. In the budding yeast expression of some 250 genes is thougt to fluctuate throug the cell cycle. The transcription factors responsible for the periodic gene expression in late G1 phase are SBF (Swi4p-Swi6p) and MBF (Mbp1-Swi6p). To further understand Swi4p function, we step up a synthetic lethal screen for genes interacting with SWI4 (Igual et al. 1996). Fourteen conditional mutations which resulted in lethality only in the absence of SWI4 have been isolated. Two of these mutants, rsf12 and msn5swi4, were characterized in details in that work. In rsf12 mutant we were demonstrated a functional link between cyclin Clb5p, PKC pathway and SBF transcription factor in DNA metabolism and cell integrity. Moreover, we were characterized that ROT1 gen is functionally linked to the PKC pathway and is required for proper mitotic exit. In msn5swi4 mutant, we were identified that Msn5p is involved in control of Start, being required specifically for SBF activity but is not affecting MBF function. The karyopherin Msn5p is essential for the export of Swi6p to the cytoplasm during G2-M phases and this regulatory mechanism is acting in every cell cycle." @default.
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