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- W1992008443 abstract "Ziel dieser Arbeit war die Konstruktion eines rekombinanten Escherichia coli Stammes, der aus D-Fruktose bzw. D-Glukose D-Mannitol, ohne Nebenprodukte, bildet. Es wurde im ersten Schritt die NAD-abhangige Mannitol-2-Dehydrogenase des heterofermentativen Milchsaurebakteriums Leuconostoc pseudomesenteroides ATCC 12291 in E. coli exprimiert. Trotz hoher Enzymaktivitat war dieser E. coli Stamm nicht in der Lage, in Ganzzell-Biotransformationen D-Mannitol aus D-Fruktose zu bilden. Die Koexpression der NAD-abhangigen Formiat-Dehydrogenase des methylotrophen Mycobacterium vaccae N10 zur Kofaktor-Regeneration fuhrte, trotz hoher Aktivitaten der beiden Enzyme, nur zur Bildung geringer Mengen D-Mannitol aus D-Fruktose und Formiat. Da E. coli normalerweise D-Fruktose uber das Phosphoenolpyruvat-Phosphotransferase System aufnimmt, ist dieser Zucker intrazellular phosphoryliert und damit kein Substrat fur die Mannitol-2-Dehydrogenase. Dieses Problem wurde durch die zusatzliche Expression des Glukose-Facilitators aus Zymomonas mobilis uberwunden, der D-Fruktose und D-Glukose durch erleichterte Diffusion ohne Phosphorylierung dieser Zucker, transportiert. Dieser E. coli Stamm war in der Lage, innerhalb von 18 Stunden bis zu 1 M D-Mannitol mit einer Ausbeute von 84 - 90 mol% und einer maximalen spezifischen Produktivitat von 9,5 g x (gZTM x h)-1 aus D-Fruktose zu bilden. Da dieser Stamm D-Glukose als Substrat zur D-Mannitol Bildung nicht nutzen konnte, wurden sowohl Glukose-Isomerasen zum Reaktionsansatz zugegeben, als auch die Glukose-Isomerase aus E. coli koexprimiert. Daraufhin bildete E. coli D-Mannitol aus D-Glukose als einziger Kohlenstoff- und Formiat als Elektronendonor, ohne Beteiligung von phosphorylierten Zwischenstufen." @default.
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