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- W1998370234 abstract "Resume Nous avons mis au point une technique de PCR in situ pour les genes CD 34 et c-Kit dans des cellules mononucleees du sang peripherique humain. Apres depot et fixation des cellules sur des lames, afin de faciliter la penetration des reactifs necessaire a la PCR, une permeabilisation des membranes est effectuee par traitement a la proteinase K. La PCR terminee, une hybridation in situ est realisee en presence d'un oligonucleotide specifique marque a la digoxigenine. Ce marqueur ainsi lie au produit d'amplification est detecte par un anticorps antidigoxigenine marque par la phosphatase alcaline. L'addition des substrats de cette enzyme (le nitro-bleu tetrazolium [NBT] et le 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate [BCIP]) permet une revelation coloree en bleu-noir des cellulles dans lesquelles la PCR a ete realisee. Nous avons egalement montre que meme dans le cas de cellules fixees sur lame, un controle de la reaction d'amplification juste apres la PCR a ete effectue. En effet, la permeabilisation des membranes cellulaires provoque une diffusion du produit d'amplification vers l'exterieur de la cellule. En prelevant apres la PCR in situ le liquide reactionnel au-dessus des cellules, il est possible de visualiser par electrophorese en presence de bromure d'ethidium le produit d'amplification." @default.
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