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• W2012058572 abstract "Extracellular matrix vesicles from rat alveolar bone were isolated by collagenase digestion and differential centrifugation. Further purification was performed by discontinuous sucrose density gradient centrifugation. Control tissues, kidney and liver, were processed according to the same procedures. Sucrose density gradient centrifugation of bone matrix vesicles revealed two peaks of enzymatic activity: “light” and “heavy” vesicle-enriched fractions. Electron micrographs revealed a higher degree of purification of the “light” rather than the “heavy” vesicle-enriched fraction. This coincided with the high levels of enzymatic activity detected in this fraction. Preparations obtained from kidney and liver had significantly lower levels of activity of alkaline phosphatase and ATPase as compared to the bone matrix vesicle fractions. There were also differences in the positions of enzyme activity peaks in the sucrose gradiant fractions from the three tissues studied. Electron microscopic examination of kidney and liver fractions revealed structures larger than the purified bone matrix vesicles. In addition no electron-dense material was found within organelles from kidney and liver and they were studded with numerous ribosomes. Our observations indicate that the present method of isolation and purification yields fractions of matrix vesicles which are specific to bone and are significantly different from those obtained from kidney and liver. Des vésicules matricielles extracellulaires de l'os alvéolaire du rat ont été isolées par digestion avec une collagénase et contrifugation différentielle. Une purification secondaire a été réalisée per contrifugation en gradient sucrose de densité discontinue. Des tissus témoins, de rein et de foie, ont été obtenus avec les même méthodes. La contrifugation des vésicules de la matrice osseuse en gradient sucrose de densité a montré deux pics d'activité enzymatique: des fractions “légéres” et “lourdes” de vésicules enrichies. La microscopie électronique a montré un degré de purification des fractions de vésicules enrichies plus élevé pour lea “Iégères” qua lea “lourdes”. Ceci coincidait avec les taux élevés d'activité enzymatique détectée dans ces fractions. Les préparations obtenues à partir de rein et de foie avaient des taux d'activité de phosphatase alcaline et d'ATPase significativement plus foibles qua les fractions de vésicules matricielles osseuses. Il existait aussi des différences dans la position des pics d'activité enzymatique des fractions de gradient sucrose pour lea trots tissus analysés. L'étude en microscopie électronique des fractions de rein et de foie a montré des structures de plus grande taille qua celles des vésicules matricielles osseuses purifiées. De plus, aucun matériel électroniquement dense We été trouvé dans lea organelles de rein et de foie que étaient parsemées de nombreux ribosomes. Nos observations indiquent qua cette méthode d'isolation et de purification extrait des fractions de vésicules matricielles qui sont spécifiques de l'os et qui sont significativement différentes de celles obtenues à partir du rein ou du foie." @default.
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