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- W2023609202 abstract "Some of the present problems in ribotyping are associated with a lack of uniform reactivity of probes when bacterial DNAs are of phylogenetically diverse origins. To overcome these problems, a set of five oligonucleotides (referred to as OligoMixS) was selected to react with conserved sequences located near both extremities of rrs (16S rRNA gene) and near both extremities and the middle of rrl (23S rRIMA gene). DNA samples from 13 bacterial species selected to represent various phylogenetic branches within the Eubacteria were cleaved by a restriction endonuclease and electrophoresed in 0.8% agarose, and the fragments were vacuum-transferred to nylon membranes and hybridized with digoxigenin-labelled OligoMix5, plasmid DNA from pKK3535 (cloned rrn operon from Escherichia coli) or pBA2 (cloned rrs from Bacillus subtilis), or acetylaminofluorene-labelled E. coli 16+23S rRNA. The results showed OligoMix5 to visualize patterns in DNA from phylogenetically diverse bacteria with comparable intensity. Banding patterns (not band intensity) obtained with OligoMix5 were identical with those obtained with 16+23S rRNA or plasmid pKK3535 for each strain studied and represented complete ribotypes. For DNA from Gram-positive bacteria, complete ribotypes were observed after prolonged enzymatic detection of bands when probes were either E. coli 16+23S rRNA or pKK3535. Patterns given by plasmid pBA2 were subsets of the complete ribotypes for 9/13 strains. Each oligonucleotide of the OligoMix5 set was used as a probe to determine its contribution to the complete ribotype. The five oligonucleotide probes, used individually, visualized one to four patterns per DNA sample. Use of DNA from Xenorhabdus sp. CIP 105189 cleaved by EcoRI is suggested to control the quality of the oligonucleotide probes composing OligoMixB. Probe OligoMixB was found to be an essential tool for ribotyping phylogenetically diverse eubacteria. En ribotypie, certains problèmes sont dus au fait que la sonde (ARNr 16+23S d'une bactérie) ne réagit pas avec la même intensité lorsque les ADN proviennent d'espèces d'origines phylogénétiques variées. Pour résoudre ce problème, un ensemble de cinq oligonucléotides (mélange appelé OligoMix5) a été choisi pour réagir avec des séquences conservées présentes près des extrémités du gène rrs (codant l'ARNr 16S) et près des extrémités et au milieu du gène rrl (codant l'ARNr 23S). L'ADN de 13 espèces eubactériennes représentant des branches phylogénétiques variées a été clivé par une endonucléase de restriction, soumis à une électrophorèse en 0,8% d'agarose et les fragments ont été transférés (transfert par le vide) à une membrane de nylon et hybrides avec OligoMix5 marqué par la digoxigénine ou avec le plasmide pKK3535 (opéron rrn clone de Escherichia coli) ou pBA2 (gène rrs de Bacillus subtilis) ou l'ARNr 16+23S de E. coli marqué par l'acétylaminofluorène. Les résultats montrent que OligoMix5 rend avec la même intensité des profils à partir d'ADN de bactéries phylogénétiquement diverses. Les profils, et non l'intensité des bandes, obtenus avec OligoMix5 sont identiques à ceux obtenus avec l'ARNr 16+23S ou avec le plasmide pKK3535, pour chaque souche étudiée. Ces profils représentent les ribotypes complets. Avec l'ADN de bactéries à Gram positif, on a observé des ribotypes complets en prolongeant la révélation enzymatique des bandes lorsque la sonde était l'ARNr 16+23S de E. coli ou pKK3535. Les profils donnés par pBA2 étaient un sous-ensemble des ribotypes complets. Les cinq oligonucléotides utilisés individuellement ont révélés un à quatre profils par souche. L'utilisation de l'ADN de la souche Xenorhabdus sp. CIP 105189, clivé par EcoRI, est recommandée pour le contrôle de la qualité des oligonucléotides composant OligoMix5. Le mélange OligoMix5 est un outil essentiel pour le ribotypage d'eubactéries phylo-génétiquement éloignées." @default.
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