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• W2043256814 abstract "In density gradient centrifugation CsCl-solutions can be replaced by solutions of NaClO4. The solubility of sodium perchlorate in water is very high. Characteristical properties of these solutions are the very low absorption at 260 nm ; its high density (ϱ = 1,7 g/cm3 for the saturated solution) ; and its high viscosity (5 centipoises). Nucleic acids are soluble in NaClO4. These properties are indeed very useful for the separation and characterization of cytoplasmic particles, and macromolecules by density gradient centrifugation. Untreated ribosomal particles are dissociated into RNA and proteins, as do cesium chloride solutions. Thus, sodium perchlorate gradients can be used to analyse the various RNA's replacing sucrose gradients. Ribonucleoprotein particles fixed with glutaraldehyde do not disintegrate and can be separated according to their RNA/protein ratio. Isopycnic gradient centrifugation results in better resolution, when gradients are made of sodium perchlorate instead of cesium chloride solutions. We studied the behavior of particles containing pulse-labeled RNA by this new method. We found that these particles owe their low density rather to an association to additional proteins ; no lipids seem to be involved. Par une étude de l'ultracentrifugation en gradient de densité nous démontrons qu'il est possible de remplacer le chlorure de césium (CsCl) par le perchlorate de sodium (NaClO4). Le perchlorate de sodium est très soluble dans l'eau et les solutions obtenues ont les caractéristiques suivantes : une très faible absorption à 260 nm, une masse volumique importante (ϱ = 1,7 g/cm3 à saturation), et une viscosité importante (jusqu'à 5 centipoises). En outre les acides nucléiques sont très solubles dans ces solutions. Ces propriétés apportent des aspects nouveaux pour la réalisation de gradients de densité. Nous avons donc réalisé l'étude de certaines macromolécules et particules des cellules HeLa par centrifugation en gradient de perchlorate de sodium. Comme les particules ribosomales sont dissociées en RNA et protéines (c'est aussi le cas dans CsCl) ces gradients ne peuvent être utilisés que pour la séparation et la caractérisation des RNA, comme on utilise les gradients de saccharose. Les particules « fixées par le glutaraldéhyde sont séparées selon leur rapport RNA/protéines. La résolution obtenue par centrifugation isopycnique est meilleure que celle obtenue avec CsCl. Pour illustrer cet avantage, nous avons étudié la particule contenant le RNA à marquage rapide, et nous montrons que la faible densité de cette particule n'est pas due à des lipides. Wir zeigen hier, daß für Dichtegradientenzentrifugation CsCl-Lösungen durch NaClO4-Lösungen ersetzt werden können. NaClO4 ist sehr gut wasserlöslich ; die Lösungen haben eine Reihe günstiger physikalischer Eigenschaften : Eine sehr geringe Absorption im Bereich bei 260 nm erlaubt eine einfache Bestimmung der Nukleinsäuren. Die hohe Löslichkeit erlaubt Lösungen mit sehr hoher Dichte (1,7 g/cm3 bei Sättigung) und hoher Viscosität (bis 5 centipoises) anzusetzen. Nukleinsäuren sind in allen NaClO4-Lösungen sehr gut löslich. Diese Eigenschaften ergeben neue methodische Perspektiven für die Dichtegradientenzentrifugation. Wir haben auf diese Weise Ribonucleoproteinpartikel und Nukleinsäuren aus HeLa-Zellen untersucht. Ribosomen zerfallen in hochkonzentrierten Perchlorat-Lösungen ähnlich wie in CsCl-Lösungen. Doch kann der Gradient wie die Zuckergradienten zur Trennung und Charakterisierung der verschiedenen RNA dienen. Mit Glutaraldehyd fixierte Partikel werden auf Grund ihrer Dichte bzw, ihres RNA-Proteingehaltes getrennt. Die Auflösung in einem NaClO4-Dichtegradienten ist besser als im CsCl-Gradienten. Wir benutzen daher die NaClO4-Dichtegradienten, um Partikel mit pulsmarkierter RNA aufzutrennen und weisen nach, daß ihre niedrige Dichte nicht durch Lipide bedingt ist." @default.
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