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• W2056803339 abstract "Resume La fixation de la malouetine 1, une diamine steroidique quaternaire, sur le DNA en double helice a ete suivie par spectroscopie ultraviolette dans differentes conditions de concentration, de force ionique et de temperature. L'analyse des variations de l'absorbance du DNA a 260 nm (effet hyperchromique) en fonction de la concentration du ligand a ete realisee a plusieurs concentrations de DNA variant autour de la valeur de la constante de dissociation du complexe [10]. On a ainsi etabli avec une bonne precision l'isotherme de fixation de la malouetine sur le DNA a 22°C et a la force ionique I = 0.05 qui correspond a une representation de Scatchard avec un changement de pente marque. On peut expliquer cet aspect par l'existence de deux types de complexes comme le suggeraient des resultats anterieurs obtenus par RMN [6]. Ces deux complexes sont caracterises par leurs constantes d'association: K1 = 4 × 104 M−1 et K2 = 1,6 × 103 M−1 ainsi que par leurs rapports stoechiometriques: n1 = 0, 18 et n2 = environ 1,5 (molecules de malouetine par nucleotide). La variation d'absorbance Δh en fonction du rapport R ([diamine]/[nucleotide]) est caracterisee, a concentration de DNA pratiquement constante, par des courbes ayant l'allure de courbes de saturation. On peut, du moins en premiere approximation, analyser chacune de ces courbes en faisant l'hypothese de sites de fixation independents et equivalents. La constante globale d'association Ka, determinee de cette maniere, a une valeur intermediaire entre celles de K1 et de K2. Bien que cette methode ne permette pas d'obtenir une valeur de la stoechiometrie, elle est bien adaptee pour suivre les variations de la constante globale d'association lorsqu'on fait varier les parametres force ionique et temperature. Les effets de la force ionique sur la fixation de la malouetine sur le DNA ont ete suivis entre I = 0,02 et I = 0,2 On observe une variation lineaire de log Ka en fonction de log I, ce qui indique une contribution electrostatique a la fixation de la diamine, comme on peut s'y attendre pour une interaction entre le DNA et un ligand charge positivement. La pente de la droite log Ka en fonction de log I permet, selon Record [20], de determiner m′, le nombre maximum d'interactions ioniques impliquees dans la fixation. On trouve ainsi m' = 2,05 ce qui indique que la malouetine se fixe sur le DNA en formant deux paires d'ions, en accord avec la structure dicationique de ce ligand. Les effets de la temperature sur la formation du complexe DNA-malouetine ont ete etudies entre 5°C et 55°C, domaine dans lequel la structure en double helice du DNA n'est pas affectee. L'analyse du diagramme de van't Hoff (log Ka en fonction de T−1) indique que la formation du complexe s'accompagne d'une variation d'enthalpie de + 4 kcal. mol−1 et d'une variation d'entropie de + 31 u.e. La reaction de fixation est donc favorisee par le changement positif d'entropie. Le changement d'enthalpie defavorable pourrait correspondre a une deformation structurale du DNA, ce qui serait en accord avec l'effet hyperchromique observe par spectroscopie en UV. Les effets en UV de deux autres diamines steroidiques quaternaires, la Δ5-dehydromalouetine 3 et la N,N′-dimethylconessine 4, ont egalement ete etudies afin de mieux comprendre les aspects steriques intervenant dans la formation du complexe DNA-diamine steroidique." @default.
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