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• W2101469740 abstract "Haemophilus parasuis es un miembro de la familia Pasteurellaceae y un importante patogeno del tracto respiratorio porcino, causante de la enfermedad de Glasser. En la actualidad, esta enfermedad es una de las que tiene mayor incidencia en el sector porcino con una elevada repercusion economica. Por este motivo, es necesario estudiar la biologia molecular de este patogeno para poder desarrollar vacunas mas eficientes que las existentes hasta el presente. Para abordar dicho estudio es imprescindible disponer de algun proceso de transferencia genetica eficaz en H. parasuis. No obstante, dado el desconocimiento que se tenia de dicho patogeno, no se conocia ningun mecanismo natural o de laboratorio que permitiera introducir DNA en H. parasuis. Por ello, el primer objetivo del presente trabajo ha sido desarrollar un metodo de transferencia genetica en H. parasuis que permita estudiar posteriormente los genes implicados en su virulencia y en la colonizacion del hospedador. En la presente tesis se ha demostrado por vez primera que H. parasuis es capaz de transformar de forma natural si el DNA exogeno contiene la secuencia ACCGAACTC, la cual es muy similar al motivo ACCGCACTT descrito en H. influenzae como Uptake Signal Sequence. Ademas, se ha optimizado este proceso, determinando las concentraciones mas adecuadas de celulas bacterianas, AMPc y DNA transformante, asi como el tiempo de incubacion. Un segundo objetivo de este trabajo ha sido averiguar el papel de la timidilato sintasa, enzima clave en la sintesis de desoxitimidina monofosfato (dTMP), en la virulencia de H. parasuis. Para ello, se ha construido un mutante knockout en el gen thyA de H. parasuis y se ha determinado la capacidad de colonizacion y la inmunogeniciad de la cepa salvaje y de dicho mutante thyA en un modelo animal de cobayas. Los resultados han mostrado que la cepa defectiva en la enzima timidilato sintasa tienen una menor capacidad de colonizacion, a pesar de que es capaz de inducir una respuesta inmune en el animal. Por ello, el mutante thyA de H. parasuis puede ser un buen candidato para el desarrollo de futuras vacunas. Finalmente, en este trabajo se ha estudiado la importancia de la proteina Fur en la virulencia de H. parasuis. Dicha proteina es un regulador pleiotropico que, entre otras funciones, controla los mecanismos implicados en la captacion de hierro. Para abordar esta parte del trabajo se propuso la construccion de un mutante de H. parasuis defectivo en la proteina Fur. Los resultados obtenidos han mostrado claramente que dicha proteina es esencial para la viabilidad de esta bacteria. Asi, se ha determinado el entorno genetico del gen fur y se ha confirmado la no viabilidad de los mutantes fur mediante la obtencion de cepas merodiploides." @default.
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