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• W2110573062 abstract "Der enzymatische Abbau von gesättigten und ungesättigten Fettsäuren verläuft im wesentlichen im Mitochondrion. Das Schlüsselenzym für den Abbau ungesättigter Fettsäuren ist die 3, 2trans-Enoyl-CoA-Isomerase, die sowohl cis- als auch trans-Doppelbindungen in ungesättigten Fettsäure-CoA-Estern mit wenig unterschiedlichen Reaktionsgeschwindigkeiten in das 2trans-Enoyl-CoA-Intermediat und damit in ein Intermediat der β-Oxidationsspirale der gesättigten Fettsäuren umlagert. Wir haben diese Isomerase gereinigt und ihre Primärstruktur durch molekulares Klonieren bestimmt. Für die Aufklärung des Mechanismus wurden auf Grund von Homologienvergleichen mit der Enoyl-CoA Hydratase gezielte Mutationen durchgeführt und die Wild-Type und mutierte Isomerase in E. coli exprimiert. Die rekombinanten Enzymproteine dienen Kristallisationsstudien. Die menschliche Isomerase ist der Ratten-Isomerase sehr ähnlich. Der Proteintransport in das Mitochondrion wurde aufgeklärt. Die Genstruktur erlaubt nun, genetische Defekte aufzuklären. Recombinant DNA-Techniques in the Study of Fatty Acid Metabolism, Paradigma Demonstrated with 3, 2trans-Enoyl-CoA-Isomerase The enzymatic degradation of saturated and unsaturated fatty acids occurs predominantly in mitochondria. The key enzyme for the degradation of unsaturated fatty acids is the 3, 2trans-enoyl-CoA isomerase which transforms cis- as well as trans-double bonds of unsaturated fatty acyl-CoA esters with rather comparable velocity into the corresponding 2trans-enoyl-CoA intermediate and thereby in one common to that of the β-oxidation spirale of saturated fatty acids. We have purified the isomerase and determined the primary structure by molecular cloning. To elucidate the isomerase mechanism we compared homologies with the enoyl-CoA hydratase, carried out site directed mutagenesis and expressed the wild type and mutant isomerase in E. coli. The recombinant 3, 2trans-enoyl-CoA isomerases are being used for cristallization studies. Human and rodent isomerase are highly homologous. We elucidated the mitochondrial import of the isomerase. Recently the organization of the human isomerase gene has been analyzed in our laboratory." @default.
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