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- W2135287789 abstract "Resumen Introduccion La apolipoproteina A-I Zaragoza (apo A-I Z, mutacion L144R) es una variante de la apolipoproteina A-I cuyos portadores tienen muy baja concentracion de colesterol-HDL (c-HDL) pero, aunque presenten factores de riesgo aterogenicos adicionales, paradojicamente no muestran signos de aterosclerosis a nivel subclinico. Estudios metabolicos in vivo realizados en los portadores heterocigotos de esta variante de apo A-I revelaron que tiene una tasa de catabolismo que duplica la de la proteina nativa sugiriendo la posibilidad de que tuviera un efecto favorable sobre el proceso global de transporte reverso de colesterol. Objetivo Establecer un sistema de expresion y purificacion de apo A-I nativa y apo A-I Z recombinantes de alto rendimiento y elevada pureza con el fin de comparar sus propiedades en distintos aspectos relativos al transporte reverso de colesterol, asi como otras caracteristicas antiaterogenicas de la apo A-I. Metodologia Partiendo del cDNA de apo A-I nativa se amplifico mediante PCR de la secuencia de la apo A-I madura y se disenaron los oligonucleotidos cebadores que permitieron el clonaje en un plasmido de expresion inducible pET-45 que incorpora una cola de Histidinas en la posicion N-terminal del peptido expresado. Mediante mutagenesis dirigida se introdujo la mutacion L144R en la secuencia madura de apo A-I para expresarla con el mismo sistema. Bacterias E. coli de la cepa BL21(DE3) fueron transformadas con los plasmidos preparados, la expresion de las correspondientes proteinas fue inducida y su purificacion realizada en condiciones no desnaturalizantes mediante cromatografia de afinidad en columnas de niquel. Resultados La expresion y la purificacion de las dos proteinas se realizo con exito y fue comprobada mediante SDS-PAGE y tecnicas inmunoquimicas. Se obtuvieron rendimientos medios superiores a 30 mg de proteina purificada por litro de cultivo con un grado de pureza del 94% para la proteina nativa y 93% para la mutante. Conclusiones Se ha conseguido un sistema de expresion y purificacion para apo A-I nativa y apo A-I Z de alto rendimiento y pureza adecuados que constituye la base para su posterior caracterizacion estructural y funcional de las propiedades antiaterogenicas de esta variante de la apo A-I." @default.
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