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• W2150175931 abstract "Zusammenfassung. Für molekularbiologische Methoden in der mykologischen Diagnostik existieren zwei prospektive Anwendungsgebiete: der Direktnachweis des Erregers ohne vorherige Anzucht und die molekulare Identifizierung von Spezies und Subspezies. Für den Nachweis von Infektionserregern werden vor allem spezifische DNA‐Sonden und/oder die Polymeraseketten‐reaktion (PCR) genutzt, wobei nur die PCR eine ausreichende Empfindlichkeit für den Direktnachweis der Erreger im biologischen Material erreicht. Die in der Literatur beschriebenen Anwendungen der PCR für die Detektion humanpathogener Pilze werden hinsichtlich ihrer Möglichkeiten und Grenzen kritisch beleuchtet. DNA‐Polymorphismen, die zur Speziesidentifizierung und zur epidemiologischen Stammtypisierung bei den medizinisch relevanten Pilzen genutzt werden können, werden durch Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus(RFLP)‐Analysen und Hybridisierung mit geeigneten spezifischen und repetitiven DNA‐Sonden sowie durch Bestimmung des Karyotyps in der Pulsfeld‐gelelektrophorese nachgewiesen. Beide Methoden wurden bisher erfolgreich für epidemiologische Studien eingesetzt, sind aber arbeits‐ und zeitintensiv. Beim einfacher durchzuführenden PCR‐Fingerprinting werden polymorphe DNA‐Abschnitte durch den Einsatz verschiedener unspezifischer Primer in der PCR amplifiziert. Die erhaltenen Amplifikationsmuster sind hinsichtlich Anzahl, Größe und Verteilung der Fragmente spezifisch für jede getestete Pilzspezies (26 verschiedene Candida ‐Arten und 8 weitere Pilzspezies). Durch einen Vergleich der Muster unbekannter klinischer Isolate mit denen geeigneter Referenzstämme kann eine Spezies‐identifizierung auch dann erzielt werden, wenn die Isolate mit herkömmlichen Mitteln nicht typisierbar sind. Die PCR‐Profile weisen neben interspeziesspezifischen Variationen auch stammspezifische Unterschiede auf, so daß die Methode auch für Stammtypisierungen im Rahmen epidemiologischer Untersuchungen eingesetzt werden kann. Summary. For mycological diagnosis molecular methods can be applied to detect the pathogen directly without prior cultivation and to identify species and subspecies. For the detection of infecting agents specific DNA probes and/or the polymerase chain reaction (PCR) are widely used, whereas normally only PCR can provide sufficient sensitivity for the direct detection of pathogens in clinical material. Prospects and limitations of PCR approaches for the detection of pathogenic fungi reported in the literature will be discussed. DNA polymorphisms which are useful for species identification and epidemiological strain typing of medically relevant fungi can be detected by such methods as the analysis of restriction fragment length polymorphisms (RFLP), and Southern hybridization with appropriate DNA probes, and as karyotyping by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). These techniques which could be applied successfully to different epidemiological studies are, however, laborious and time‐" @default.
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