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• W2170469061 abstract "African Cassava Mosaic Virus (ACMV) was purified by a method which allowed the separation of monomer from dimcr virus particles. Optimal conditions for storing purified virus to be used for immunization were determined by ELISA and inoculation on Nicotiana benthamiana. Purified virus could be stored without loss of infectivity and serological activity for more than 145 days at 4 °C or frozen at –20 °C, but not longer than 40 days in the presence of 50 % redistilled glycerol. Rabbit and chicken immunoglobulins were used to detect ACMV in cassava leaves by direct and indirect ELISA. To obtain the same absorbance values, it was necessary to use longer incubation times with the indirect method, but the virus detection end-point m sap from infected plants was the same for the two methods (1/512). Conditions for improving virus detection tn cassava samples were determined. The virus was better detected when leaves from diseased plants were ground in 100 mM Tris-HCl containing 1 % polyvinylpyrrolidone at pH 8.5 than in phosphate buffer. Plant inhibitors were the restricting factor in the detection of virus by ELISA, but this difficulty was avoided when leaves to be tested were harvested from the top of the cassava plants. African Cassava Mosaic Virus (ACMV): Stabilität des gereinigten Virus und verbesscrte Bedingungen für dessen Entdeckung in Cassavablättern durch ELISA Bei der Reinigung von african cassava mosaic virus (ACMV) wurde eine Methode angewandt, wodurch die Trennung der Monomer- und Dimerviruspartikeln möglich war. Die optìmalen Aufbewahrungsbedingungen des gereinigten Virus, das für Immunisationsstudien benutzt werden soil, wurden durch ELISA und Inokulation an Nicotiana benthamiana ermittelt. Das gereinigte Virus ließ sich ohne Verlust an Infektivität oder serologischen Aktivität bei 4°C oder eingefroren bei —20°C länger als 145 Tage aufbewahren, jedoch nicht länger als 40 Tage in 50%igen redestilliertem Glycerol. Mit Hilfe von Kaninchen- und Hülinerimmunoglobulinen wurde ACMV in Cassavablättern durch direkten oder indirekten ELISA ermittelt. Um die gleichen Absorptionswerte zu erreichen, waren längere Inkubationszeiten mit der indirekten Methode notwendig, jedoch wurde der gleiche Virusentdeckungsendpunkt (1/512) im Saft infizierter Pflanzen durch beide Methoden ermittelt. Festgestellt wurdcn die Bedingungen, um die Virusentdeckung in Cassavaproben zu verbessern. Bessere Ergebnisse wurden erreicht, wenn Blätter von befallenen Pflanzen in 100 mM Tris-HCI, die 1 %ige Polyvinylpyrrolidon bei pH 8,5 enthielt, statt in Phosphatpuffer gerieben worden waren. Pflanzliche Inhibitoren waren die einschränkenden Faktoren bei der ELISA-Virusermittlung, diese Schwierigkeit konnte jedoch umgangen werden, mdem die zu untersuchenden Blätter von der Spitze der Cassavapflanzen gesammelt wurden. La purification du virus de la mosaïque africaine du manioc est rendue difficile à cause de sa faible concentration et de sa localisation dans des tissus profonds de la plante. Une méthode utilisant du Triton X-100 à 1 % et un gradient de 20 à 50 % de saccharose nous a permis la purification de particules virales répondant aux caractéristiques des geminivirus et de séparer des formes monoméres et diméres de ce virus. Des préparations de virus purifyé peuvent être conservées plus de 145 jours à 4°C ou à—20°C sans perte d'infectivité ou d'activité sérologique. Des anticorps contrc ce virus ont été préparés par immunisation de lapins et de poules. Les inhibiteurs de la plante et la faible concentration du virus dans la plante rendent difficile la détection de ce virus par les méthodes immunoenzymatiques. Ces difficultés sont surmountées quand les feuilles à tester sont récoltées au sommet de la plante et broyées dans un tampon Tris-HCI 0.1 M à pH 8.5 contenant 1 % de polyvinylpyrrolidone. Les mêthodes ELISA directe et indirecte permettent alors une bonne détection du virus. Pour obtenir les memes réponses en ELISA, il faut incuber le substrat plus longtemps pour la methode indirecte. Le virus peut être détecté dans les feuilles de manioc jusquè une dilution de 1/512 pour les deux méthodes." @default.
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