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• W2287994611 abstract "La citocromo P450 reductasa (CPR) es una flavoproteina que coordina la transferencia de electrones desde el NADPH hacia distintas hemoproteinas, como los citocromo P450 (CYPs), el citocromo b5, y la hemooxigenasa. Los CYPs se encuentran involucrados tanto en la sintesis de compuestos endogenos, tales como esteroles y acidos grasos, como en la activacion y detoxificacion de compuestos exogenos. Pese a que existen numerosos genes CYP funcionales en mamiferos, existe solo una CPR en cada especie. La produccion de una clase especial de esteroles, entre los que se incluyen el ergosterol y otros metil-esteroles, es una importante via metabolica involucrada en el crecimiento y la viabilidad celular de microorganismos eucarioticos, como protozoos u hongos, que se encuentra ausente en mamiferos. En T. cruzi se han identificado y caracterizado bioquimicamente una familia de genes integrada por tres putativas CPRs, llamadas TcCPR-A, TcCPR-B y TcCPR-C, cuyas secuencias poseen los dominios conservados para FMN, FAD y NADPH. TcCPR-A carece del domino hidrofobico amino terminal. La sobreexpresion de TcCPR-B en epimastigotes incrementa su resistencia a drogas, sugiriendo su participacion en el metabolismo de detoxificacion del parasito. En la busqueda de un rol fisiologico para las TcCPRs, en el presente trabajo se analizo el efecto de la sobreexpresion de las mismas, centrandose principalmente en su posible participacion en la biosintesis de esteroles. Una cepa de Saccharomyces cerevisiae deficiente para CPR fue utilizada en ensayos de complementacion con las TcCPRs recombinantes de T. cruzi. La baja tasa de crecimiento y la disminucion de la resistencia al ketoconazole de la levadura mutante, lograron revertirse parcialmente solo con TcCPR-B y -C. La sobreexpresion de TcCPR-A en celulas de epimastigotes resulta letal, produciendo un aumento del contenido de ADN, una morfologia aberrante y numerosas alteraciones ultraestructurales. La sobreexpresion de TcCPRB y -C incremento la biosintesis de ergosterol y la relacion NADP+/NADPH. Los parasitos transgenicos con mayor contenido de ergosterol presentaron un aumento en el orden de membrana, con la respectiva disminucion de la endocitosis. Notablemente, TcCPR-B se ha encontrado en reservosomas mientras que TcCPR-C se ha localizado en el reticulo endoplasmatico. Los resultados obtenidos en esta Tesis junto al correspondiente analisis bibliografico permiten proponer un rol para las TcCPRs en mecanismos de estres (TcCPR-A), en reacciones de detoxificacion (TcCPR-B) y en la biosintesis de esteroles (TcCPR-C)." @default.
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