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- W2294443246 abstract "Os membros da familia de fatores de transcricao Ets contem um dominio de ligacao ao DNA, chamado dominio Ets, que reconhece uma sequencia rica em purinas, cujo consenso central e formado pela sequencia 5 -GGAA/T-3 . O dominio Ets pode ser produzido como um fragmento de proteina que se enovela independentemente, numa estrutura estavel, sendo suficiente para que ocorra ligacao ao DNA. A proteina Spi-C pertence a subfamilia Spi e se caracteriza por ser expressa durante diferentes estagios do desenvolvimento de celulas B e em macrofagos. Existem alguns trabalhos publicados que descrevem o reconhecimento por Spi-C de algumas sequencias de DNA, previamente estudadas para a proteina PU.1, membro da mesma subfamilia. A expressao de Spi-C sobrepoem-se com a de PU.1 ao longo do desenvolvimento das celulas B. Existem promotores de genes envolvidos no desenvolvimento de celulas B que contem sitios para a ligacao de proteinas Ets. Estudos quanto a ligacao da Spi-C nos mesmos podem contribuir para acrescentar dados sobre a funcao desse fator de transcricao e sobre a regulacao da transcricao desses genes. Neste trabalho, apresentamos a construcao do gene, a expressao heterologa do dominio Ets da proteina Spi-C humana em Escherichia coli e a sua purificacao por FPLC com rendimento de aproximadamente 0,7mg de proteina por grama de celula. Com o objetivo de investigar novas sequencias promotoras alvo para Spi-C, foram realizados estudos de ligacao a sequencias de DNA localizadas nos promotores dos genes que codificam para a subunidade do receptor de IL-7 e para a proteina transmembrana integrante do complexo receptor de celulas B, Igα. Estas proteinas participam do desenvolvimento de celulas B e sao essenciais para a selecao das mesmas na medula ossea. Nossos resultados demonstram que o dominio Ets de Spi-C reconhece e se liga a essas sequencias de DNA (migracao em gel) formando complexos de diferentes tamanhos. O dominio Ets foi capaz de se ligar a sequencias de DNA in vitro numa proporcao maior do que 1:1 sendo que, quanto maior a concentracao do dominio maior foi o retardo do DNA no gel. Surpreendentemente, o dominio Ets nao foi capaz de discriminar as sequencias selvagens, daquelas com mutacoes no consenso central de ligacao, mantendo o mesmo perfil de retardo das bandas, sugerindo que o restante da proteina e importante para esse reconhecimento" @default.
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