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• W2300551402 abstract "EINLEITUNG: Activine sind sezernierte dimere Polypeptide, die zur TGF β Familie der Wachstums- und Differenzierungsfaktoren gehoren. Activine regulieren Zellwachstum, Differenzierung, Migration und Angiogenese in verschiedenen Geweben und Organen. Die Funktion von Activinen wird seinerseits durch extrazellulare Antagonisten (Follistatin und FLRG) und antagonistische Co-Rezeptoren an der Zellmembran (Cripto) limitiert. Deregulierung von Activin Signalen wurde in mehreren Tumorarten gefunden und in direkten Zusammenhang mit dem malignen Wachstum von Tumorzellen gebracht. ZIELE: Das Ziel dieser Studie war es, (1) die Expression von Aktivinen und Aktivinantagonisten in Melanomzellen zu untersuchen, (2.) den Einfluss von Follistatinuberexpression auf Melanomzellen zu testen und (3.) mogliche Signaltransdutionsmechanismen der Aktivin Beta E Untereinheit zu analysieren. METHODEN: Die Expression aller vier Aktivin Untereinheiten und antagonistischer Faktoren wurden in einer Reihe von humanen Melanomzellen durch quantitative RT-PCR untersucht. 3 Melanomzelllinien wurden stabil mit Follistatin transfiziert und die Uberexpression wurde mittels ELISA bestatigt. Diese Zellen wurden dann in-vitro-in Migrations- und Proliferations-Assays getestet. Fur Follistatin uberexprimierende VM21 Zellen wurden auch Xenotransplantationsexperimente in SCID-Mausen durchgefuhrt. Die Auswirkungen von Activin E, Activin A und Follistatin auf den Smad Signalweg wurde mittels Western-Blot Analyse untersucht. ERGEBNISSE: Das Expressionsniveau von Activin C war in Melanomzelllinien erhoht (83%) im Vergleich zu primaren Melanozyten. Die Expressionniveaus von Activin beta B (75%) und Activin beta E (92%) dagegen reduziert, wahrend Activin beta A unterschiedliche Regulation in Abhangigkeit von der Zelllinie zeigte. Expression von Follistatin (75%) und Cripto (100%) war erhoht. Die Expression der anderen dem Follistatin verwandten Proteinen, FLRG und Follistatin-like-1 war je nach Zelllinie erhoht oder reduziert. Nur eine der beiden Isoformen von Follistatin (Fst-315) wurde in nahezu allen Melanomzellen und in primare Melanozyten gefunden. Uberstande von stabil transfizierten Zellen enthielten mehr als 10-fach soviel Follistatin wie die Kontrollzellen. Uberstande Follistatin exprimierender Zellen waren auch in der Lage Smad-Phosphorylierung durch zugegebenes Aktivin A zu neutralisieren. In-vitro, zeigten die Follistatin uberexprimierenden Zellen eine Tendenz zu verminderter Proliferations, aber teils erhohter Klonogenizitat. Die Migrationsfahigkeit der Melanomzellen wurde um 20%-80% reduziert, wenn Follistatin uberexprimiert wurde. Die Rolle der Follistatin vermittelten Hemmung des Activins wurde auch durch Xenotransplantation Experimente von VM21 Zellen in SCID-Mausen getestet. Allerdings war hier kein Unterschied im Tumorwachstum verglichen mit GFP-Kontrollen zu erkennen. Bezuglich moglicher Signalwege von Activin E wurde nachgewiesen, dass durch Aktivin E konditionierte Medien im Gegensatz zu Aktivin A konditionierte Medien keine Smad2 Phosphorylierung aktiviert wird. Auswirkungen der Konditionierung von Medien mit unterschiedlichen Kombination von Activin E, Aktivin A und Follistatin liessen auch weder eine Blockierung noch eine Verstarkung von Aktivin A induzierten Signalen durch Aktivin beta E - wie etwa durch Ausbildung von AE Heterodimeren oder Konkurrenz um Aktivinrezeptoren oder Follistatinbindung - erkennen." @default.
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