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• W2343718554 abstract "Scopo della ricerca sviluppata durante questi tre anni di Dottorato e quello di spiegare i meccanismi sottesi alla risposta allo stress ossidativo nell'uomo a livello integrativo e molecolare.Per questo fine, nel primo anno di Dottorato, si e innanzi tutto implementato un metodo quantitativo assoluto atto a valutare la produzione dei radicali liberi.Come e noto cio che importa e l’equilibrio tra produzione di Specie Reattive dell’Ossigeno (ROS) e la disponibilita di difese antiossidanti. Quando questo equilibrio viene meno, si parla di Stress Ossidativo, con conseguenze a carico degli acidi nucleici, dei lipidi e delle proteine, compromettendo il metabolismo e la vitalita cellulare, fino a indurre apoptosi o necrosi. Questo e un fenomeno ricorrente in molte malattie acute e croniche oltre che nel fisiologico processo di invecchiamento. Allo scopo si e utilizzata la tecnica di Risonanza Paramagnetica Elettronica (EPR) accoppiata a specifiche sonde molecolari (spin trapping) per sviluppare un metodo quantitativo “in vivo” in grado di monitorare la produzione di ROS in campioni biologici quale il sangue e sue frazioni. Gli inizi del mio periodo di Dottorato sono fortunatamente coincisi con l’acquisizione da parte dell’Istituto di Bioimmagini e Fisiologia Molecolare (IBFM) del CNR (Lita di Segrate), di uno strumento EPR che risponde alle esigenze di maneggevolezza e portabilita (e-scan Bruker BioSpin, Germania), di recente immissione sul mercato, che opera in onda continua (CW), nella banda X delle µW, in grado di rilevare concentrazioni molto basse (nM) in piccoli campioni (50 µl), utilizzando una cavita risonante le cui proprieta ottimizzano il fattore di riempimento, conferendo un’elevata sensibilita allo strumento.L’attendibilita dell'efficacia del metodo sviluppato e stata verificata con correlazioni tra metodi classici enzimatici e misure EPR in vari stati: fisiologici e parafisiologici.Trattandosi della messa a punto di un metodo di misura completamente innovativo e mancando pertanto dati di letteratura cui fare riferimento, si sono rese necessarie molte prove sperimentali da campioni ematici, in un vasto gruppo di soggetti, con tantissime acquisizioni modificando e ottimizzando di volta in volta i parametri e le condizioni (T, pO2) Questo procedimento e stato lento e laborioso; una volta superate le difficolta tecniche, si e avuto a disposizione un piccolo catalogo di misurazioni che e servito ad ottenere i primi dati sperimentali che saranno illustrati nei primi paragrafi di questa tesi. Si e inoltre cercata una correlazione statistica tra la produzione di ROS determinata con tecnica EPR ed i marcatori dello stress ossidativo ottenuti dai vari test convenzionali enzimatici riportati in letteratura quali il dosaggio da sostanze reattive all'acido tiobarbiturico (TBARS) e carbonili proteici (PC) in grado di quantizzare il danno “a posteriori” prodotto dai ROS su lipidi e proteine rispettivamente. Una correlazione sistematica tra i dati EPR e i dati enzimatici non era certa, in quanto questi ultimi…" @default.
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