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• W2623143942 abstract "Les lipides fournissent la majorite des calories necessaires pour assurer le bon developpent des nouveau-nes. La digestion lipidique est initiee par la Lipase Gastrique humaine (LG) qui joue un role central dans la digestion neonatale. La LG semble pouvoir attaquer les Globules Gras natifs du lait (GG) malgre leur structure supramoleculaire complexe (ᴓ 0,1-10 µm, moyenne 4 µm) et leur membrane tricouche protectrice (e ~ 15 nm). L’action de la LG (ᴓ ~ 5 nm) sur ce substrat naturel n’a jamais ete etudiee en detail et aucune donnee n’est publiee sur la capacite d’insertion de cette enzyme dans la membrane tricouche du GG. Cette etude vise donc a immunolocaliser la LG pendant l’hydrolyse des GG natifs et a preciser sa distribution a la surface du substrat par deux techniques microscopiques complementaires de resolutions croissantes : microscopie confocale (MC, Nikon C1Si - microscope TE2000-E, lasers argon 488 nm, He-Ne 543 et 633, obj 60) et microscopie electronique a transmission (MET, JEOL 1400 120KV). Un substrat modele du lait bovin contenant des GG natifs est utilise. Pour l’approche en MC, ce substrat a ete soumis a un protocole de digestion semi-dynamique simulant la phase gastrique du nouveau-ne (descente en pH et concentration enzymatique) avec marquage des proteines, lipides apolaires et lipides membranaires par des sondes commerciales. Le phenomene d’agregation acide des GG sans perte de leur structure a ete mis en evidence. Des digestions statiques complementaires avec marquage des lipides membranaires et immunomarquage de la LG apres 5 min d’hydrolyse (Ac I anti-LG polyclonal hote lapin, Ac II anti-IgG (H+L) lapin hote âne) ont revelees des zones d’adsorption de la LG aux interfaces des GG et une adsorption favorisee aux pH bas (3-4). Pour preciser l’insertion membranaire de la LG, la digestion a ete repetee a pH optimum (4) et soumis a un protocole d’observation MET : avec immunomarquage a l’or de la LG (Ac II anti-IgG Lapin marquage or 6 nm hote chevre) en pre-inclusion. Ce protocole a confirme des zones d’insertion de 2-5 molecules de LG au sein de la membrane et la presence de produits de lipolyse a l’interieur des GG. Des repetitions des observations MET a differents temps d’hydrolyse et une approche en AFM completeront cette description de la distribution de la LG au cours de l’hydrolyse de ce substrat essentiel pour la nutrition neonatale." @default.
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