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- W2729103620 abstract "L'architecture et la dynamique des molecules formant la membrane cellulaire sont des elements-cles de la comprehension des mecanismes qui gouvernent l'activite cellulaire. Des resultats recents dans notre equipe [1] ont montre que la spectroscopie de correlation de fluorescence (FCS) etait une approche pertinente dans ce contexte. Elle a permis notamment de quantifier in-vivo des structures membranaires [2], mesure inaccessible en microscopie conventionnelle. Nous proposons d'etendre cette technique a l'etude spatio-temporelle de la cellule au cours d'un evenement de signalisation. Dans un tel etat transitoire, il est raisonnable de penser que la perturbation apportee ne sera pas distribuee uniformement sur l'ensemble de la cellule mais localisee initialement aux regions activees, pour ensuite cheminer progressivement vers le noyau. Aussi, afin de garantir la meilleure description tant spatiale que temporelle, la nouvelle experience que nous developpons utilise deux points de mesure independants pouvant etre positionnes arbitrairement par l'experimentateur dans la cellule a etudier. Ces deux points peuvent etre utilises soit pour mener deux mesures distantes simultanees, soit pour etudier les correlations temporelles entre regions cellulaires voisines. Nous presentons une serie complete de procedures permettant de mesurer en temps reel les positions relatives de ces deux points, parametre cle de notre methode. Dans, le plan, une methode d'imagerie reciproque permet de mesurer les positions avec une precision de l'ordre de 50 nm. En profondeur, une procedure automatique de balayage longitudinal permet, a meme l'echantillon, de mesurer des differences de profondeur a 500 nm pres. En definitive, l'espace total accessible par les deux points de mesure, couvre plusieurs dizaines de microns dans le plan et une dizaine de microns en profondeur. Sur ces dimensions compatibles avec les echelles cellulaires, des mesures de FCS en solution ont confirme la bonne homogeneite des conditions de mesure (volume confocal et taux de comptage par molecule). Differents modes de balayages sont en outre possibles pour chaque point de mesure, permettant de completer les mesures ponctuelles par l'acquisition d'images ou de signaux mesures sur des trajectoires arbitraires. Actuellement equipee d'un laser continu, l'experience accueillera prochainement un laser impulsionnel Sa :Ti accordable, qui permettra, par excitation a deux photons, d'etendre la gamme de marqueurs fluorescents accessibles, et donnera acces a des nouveaux types de contrastes non-lineaires, comme la generation de second harmonique." @default.
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