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- W2754971219 abstract "A quantificacao de RNA mensageiro e amplamente utilizada em estudos de expressao genica. O metodo de reacao em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) em tempo real e um dos mais sensiveis e eficientes para examinar os padroes de expressao. Para que se tenha uma analise confiavel, a escolha de genes constitutivos estaveis e essencial. Estes genes devem apresentar expressao constante, independentemente do tecido ou tratamento utilizado. Isto permite a normalizacao de diferencas existentes na quantidade inicial de RNA, em possiveis variacoes experimentais e na sintese de cDNA. Diversos genes como GAPDH, RNA ribossomico 18S e actinas sao empregados, porem variacoes ja foram observadas, sugerindo que nenhum gene possa ser considerado estavel para todas as condicoes experimentais. O objetivo deste trabalho foi selecionar um gene constitutivo estavel em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos. Dez bezerros da raca Nelore foram mantidos livres de infeccoes por parasitos desde o nascimento. Esses animais foram separados em dois grupos: 5 animais submetidos a infeccao artificial com larvas de Haemonchus spp (grupo tratamento) e 5 animais livres de infeccao (grupo controle). A coleta de amostras de tecidos e linfonodos abomasais foi feita sete dias apos a infeccao. O isolamento do RNA total foi feito com reagente Trizol (Invitrogen) e sintese de cDNA por transcricao reversa. A quantificacao dos genes RPL-19, GAPDH e HPRT-1 foi avaliada pela tecnica de RT-PCR em tempo real utilizando SYBR Green como corante. As analises referentes as quantificacoes foram realizadas com os valores de Ct obtidos para cada gene. A fim de verificar possiveis variacoes entre os genes, foram utilizados os programas Analyse-it (Excel), o teste nao parametrico Randomisation test e o programa de normalizacao Genorm. Os resultados mostraram que para linfonodo abomasal os genes RPL-19 e GAPDH nao apresentaram expressao diferencial entre os tratamentos (p>0,05), enquanto que HPRT-1 foi diferencialmente expresso (p<0,05) no teste nao parametrico Randomisation test. Entre os genes RPL-19 e GAPDH os valores de desvio e erro padrao foram 1,23, 0,39 e 2,24 e 0,71, respectivamente. Para abomaso, nao houve diferenca significativa entre os grupos experimentais para nenhum dos tres genes analisados e o gene RPL-19 apresentou o menor desvio e erro padrao (2,34 e 0,74, respectivamente). A analise realizada pelo programa Genorm mostrou que para ambos os tecidos, o gene RPL-19 foi o mais estavel entre os tres. Desta maneira, o gene RPL-19 foi o que mostrou maior estabilidade entre os genes analisados, podendo ser empregado em estudos de expressao genica com tecidos e linfonodos abomasais de bovinos." @default.
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