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• W2786508897 abstract "A superproducao de especies reativas de oxigenio e nitrogenio ou a reducao na capacidade antioxidante resulta no estresse oxidativo. A peroxidacao lipidica envolve a degradacao oxidativa de acidos graxos polinsaturados e este processo esta envolvido na patogenese de doencas como câncer, diabetes, aterosclerose e doencas neurodegenerativas.Ja que a quantificacao direta de radicais livres in vivo e complexa, torna-se necessario realizar a medida de seus produtos de reacao, e o malondialdeido (MDA) e um dos produtos secundarios da peroxidacao lipidica mais conhecidos utilizado como indicador de injuria da membrana celular. O MDA tem sido medido atraves de sua reacao com o acido tiobarbiturico (TBA), o qual produz o complexo MDA-TBA2, detectado por espectrofotometria metodo conhecido como substâncias reativas ao acido tiobarbiturico (TBARS). Porem, o maior problema neste metodo e a falta de especificidade, uma vez que o TBA reage com uma variedade de compostos, superestimando os valores reais de MDA. Assim, metodos envolvendo cromatografia liquida de alta eficiencia (CLAE) tem sido descritos, sendo mais especificos e sensiveis. Neste estudo, um metodo rapido e confiavel para quantificar MDA plasmatico por CLAE, com deteccao visivel, foi otimizado e validado. Os parâmetros analiticos avaliados foram: linearidade, precisao, exatidao, recuperacao, sensibilidade, robustez e estabilidade. O metodo otimizado foi aplicado em pessoas de um asilo da cidade de Santa Maria. As amostras de plasma sofreram hidrolise alcalina com NaOH, para uma liberacao completa das proteinas ligadas ao MDA, seguida por desproteinizacao acida com H3PO4 e derivatizacao com TBA. Para remocao de interferentes, realizou-se extracao da amostra com n-butanol antes da injecao no cromatografo. A analise de MDA foi feita em coluna C18, integrada a uma pre-coluna. A fase movel constituia de KH2PO4 2,5 mM e metanol (50:50), com eluicao isocratica e deteccao a 532 nm. A analise foi linear de 0,28 a 6,6 μM. As precisoes intra e inter-dia foram obtidas com CV% < 4% a < 11%, respectivamente. A exatidao (bias%) variou de -4,1 a 2% e a recuperacao variou de 95,9 a 102,7%. O limite de deteccao foi de 0,05 μM e o limite de quantificacao foi de 0,17μM. Para os testes de estabilidade, observou-se que as solucoes padroes de MDA foram estaveis por, no minimo, 18 meses a -20oC. O plasma foi estavel por 24h quando estocado a -20oC e instavel 4oC. Armazenado a -20oC apos hidrolise alcalina, o MDA plasmatico nao permaneceu estavel; por outro lado, as amostras continuaram estaveis por 30 dias quando armazenadas apos derivatizacao com TBA, a -20oC. Depois da extracao com n-butanol, os niveis de MDA foram estaveis por 3 dias armazenados a -20oC. O metodo foi aplicado em amostras de plasma de individuos saudaveis entre 60 e 80 anos. Os idosos apresentaram niveis plasmaticos de MDA de 4,45 ± 0,81 μM para mulheres e 4,60 ± 0,95μM para homens, sem diferenca significativa. Estes valores foram considerados como valores de referencia para esta faixa etaria em nosso laboratorio.Assim sendo, os resultados demonstraram que uma tecnica simples, rapida e especifica foi otimizada e validada. O metodo mostrou ser confiavel em todos os parâmetros analiticos, e pode ser usado em rotinas nos laboratorios clinicos." @default.
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