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• W2891978588 abstract "Les coronavirus humains se regroupent en deux souchesserotypiques, 229E et OC43, et causent des maladies respiratoires(Myint, 1994), gastro-intestinales (Resta et al., 1985), et ont ete associes a des myocardites (Riski and Hovi, 1980). Plusieurs observations suggerent que les coronavirus humains pourraient aussi etre neurotropes. Des particules coronavirales furent observees dans des echantillons provenant de cerveaux de patients atteints de sclerose en plaques (Tanaka et al .. 1976). Des taux d'anticorps anticoronavirus humains eleves ont aussi ete trouves dans le liquide cephalo-rachidien de patients atteints de sclerose en plaques, ce qui suggere une implication possible de ce virus dans l'etiologie de la maladie (Salmi et al., 1982). Deux souches de coronavirus ont ete isolees a partir d'echantillons provenant du cerveau de patient atteints de sclerose en plaques (B urks et al., 1980) et l'inoculation intracerebrale de ces virus a des primates a provoque une maladie demyelinisante (11urray et al.. 1992). En plus, le genome du coronavirus humain 229E (HCV-229E) a ete amplifie a partir d'echantillons de patients atteints de sclerose en plaque mais pas de temoins (Stewart et al .. 1992). Ces etudes sont en accord avec l'hypothese que les coronavirus humains pourraient etre impliques dans l'etiologie de maladies neurologiques comme la sclerose en plaques. Par contre, le neurotropisme comme tel n' a pas ete prouve jusqu'a date. Des etudes avec des lignees continues ont demontre que les coronavirus humains peuvent infecter des cellules nerveuses murines et humaines, et que l'infection est productive (Pearson and Mims, 1985; Talbot et al., 1994; Talbot, communication personnelle). Toutefois, ces lignees cellulaires etant immortalisees, il est possible que leur infection ne reflete pas correctement le contexte naturel. Le but du projet de maitrise etait, donc de determiner l'infectabilite des cellules nerveuses humaines en culture primaire par les coronavirus humains 229E et OC43, une etape importante dans la demonstration du neurotropisme des coronavirus humains, les cultures primaires se rapprochant le plus de la situation in vivo. Pour detecter les :11Higenes vitaux exprimes dans les cellules infectees, nous avons utilise la methode d'immunofluorescence indirecte. Pour de tee ter les antigenes produits par HCV -229E, nous avons utilise 1 'anticorps monoclonal 5-11 H.6 et un anticorps polyclonal de lapin, les deux diriges contre 229E. Nous n'avons pas pu detecter la presence d'antigenes viraux, 111 clans les cellules humaines neuronales et astrocytaires foetales, ni clans les microglies, oligodendrocytes ou astrocytes adultes humains. Pour detecter les antigenes d'HCV-OC43, nous avons utilise 1 'anticorps monoclonal 4-Ell.3 anti-HEV et un anticorps polyclonal cie cobaye anti-OC43. Ce dernier anticorps fut produit expressement pour les experiences presentees ici. Des antigenes de HCV -OC43 ont ete detectes dans des cellules humaines astrocytaires foetales, microglies et astrocytes adultes, mais n'ont pas ete detectes dans les neurones foetaux m dans les oligodendrocytes. Etant donne les resultats negatifs en immunofluorescence dans le cas de HCV-229E, nous avons utilise une technique beaucoup plus sensible, le RT -PCR/Southern blotti ng, qui permet de detecter 1 'ARN viral dans des cellules infectees. Avec cette technique, nous avons pu detecter l' ARN de 229E dans des cellules humaines astrocytaires foetales, microglies adultes et dans un melange d' oligodendrocytes et astrocytes adultes. Les echantillons de neurones etant tres difficiles a obtenir, ils n'ont pas pu etre testes avec cette technique.adultes. Nous avons aussi pu detecter par microscopie electronique la presence d'HCV -OC43 dans des astrocytes foetaux infectees en utilisant la methode des coupes ultra-minces. Nous avons detecte et quantifie les particules virales infectieuses produites apres l'infection cles cultures primaires par la methode d'immunoperoxydase indirecte. Des particules infectieuses d'HCV-229E et d'HCV-OC43 ont ainsi ete detectees dans des cultures d'astrocytes foetaux infectes. Egalement, un taux tres bas de particules infectieuses d'HCV-OC4 a ete detecte dans les cultures de microglies et d'oligodendrocytes/astrocytes adultes. La difference dans les titres de vus produits pourrait etre due a la difference dans la concentration de cellules clans chaque echantillon. Etant donne que nous avons travaille avec des cultures primaires, nous ne pouvions pascontroler ce parametre. Finalement, nous avons produit cinq hybridomes secretant des anticorps monoclonaux an ti-OC43. Les resultats de ce projet de recherche montrent l'infectabilite de certains types de cellules gliales humaines par les deux souches prototypes du coronavirus humain. La difference clans les degres d'infectabilite par les deux souches du coronavirus humain n'est pas surprenante car ce phenomene a ete montre dans le modele de souris (Dubois-Dalcq et al., 1982; Gagneten et al., 1995). Le type de cellules qui sont infectables est similaire a celui observe dans l'etude fait avec HCV-OC43 et les cellules nerveuses primaires de souris et clans celui fait avec des cultures primaires foetales humaines (Pearson et !1ims, 1985). Il est interessant de constater que les resultats clans le modele de souris concordent avec les resultats chez l'humain. Par contre, les resultats obtenus en culture primaire ne correspondent pas tout a fait avec ceux en lignees continues ou les deux souches virales, 229E et OC43 montrent une haute infectabilite. un grand taux de production virale et ou tous les types de cellules nerveuses sont infectables (Talbot, communication personnelle). Meme si notre etude presente de l'information plus detaillee dans la caracterisation de 1 'infection des cellules nerveuses humaines par les coronavirus humains, il y encore beaucoup a faire dans le domaine pour comprend re le neurotropisme des corona virus, et faire le lien avec des maladies neurologiques. Finalement, il est interessant de noter que les coronavirus humains semblent infecter les memes types de cellules nerveuses que le virus de l'immunodeficience humaine, soit les astrocytes et les microglies (Sharpless et al., 1992). Abstract The goal of this project was to determine the infectability of human primary cultured neural cells by human coronaviruses (HCV) 229E and OC43. To detect viral antigens expressed m infected cells we used an indirect immunofluorescence technique. To detect antigens of HCV-229E we used monoclonal antibody 5-IIH.6 and a rabbit polyclonal antiserum, both anti-229E . Ve could not detect the presence of viral antigens in infected human fetal neurons, fetal astrocytes, adult microglia, adult oligodendrocytes or adult astrocytes. To detect antigens of HCY -OC43 we used monoclonal an ti body 4-E 11.3 anti-HEV and a guinea pig polyclonal antibody to OC43. The latter reagent was produced for these experiments. Viral antigens were detected in infected human ferai astrocytes, a du lt microglia and adult astrocytes but not in fetal neurons and adult oligodendrocytes. Finally, five hybridomas secreting monoclonal antibodiesdirected against HCV -OC43 were produced. To verify the negative results obtained with HCV -229E we used a more sensitive technique, RT -PCR/Southern-blotting, to detect viral RNA in infected cells. With this method, we could detect HCV -229E RNA in fetal astrocytes, adult microglia and in a mtx of adult oligodendrocytes and astrocytes. The neuron samples were scarce so we could not test them with this technique. Also, we have detected the presence of HCV-OC43 in infected cells by electron microscopy of ultra-thin sections. We have detected and quantified the infectious particlesproduced after infection of the primary cultures using the indirect immunoperoxidase method. Infectious HCV -229E and HCV-OC43 particles were detected in cultures of infected fetal astrocytes. Low amounts of infectious OC43 were also detected in infected adult astrocytes, oligodendrocytes and microglial cultures possible for HCV-229E. We have detected and quantified the infectious particlesproduced after infection of the primary cultures using the indirect immunoperoxidase method. Infectious HCV -229E and HCV-OC43 particles were detected in cultures of infected fetal astrocytes. Low amounts of infectious OC43 were also detected in infected adult astrocytes, oligodendrocytes and microglial cultures." @default.
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