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• W2907286072 abstract "La simbiosis rizobio-leguminosa es altamente especifica. La translocacion de proteinas denominadas efectores desde el citoplasma bacteriano a la celula vegetal es un elemento relacionado con dicha especificidad. Los efectores pueden ser translocados a traves de diferentes sistemas de secrecion. El analisis de genomas de rizobios ha permitido identificar en algunos la presencia de sistemas de secrecion de tipo VI (T6SS). El T6SS tiene como componente principal una nanoestructura similar a las que utilizan los bacteriofagos1 para inyectar su ADN y que las bacterias usan para secretar proteinas. Los genes implicados en la formacion de T6SS estan agrupados y los que codifican para componentes estructurales del sistema presentan mayor grado de conservacion entre rizobios y frente a otras bacterias en comparacion a los genes que codifican para efectores y reguladores del sistema. En nuestro grupo se esta estudiando el T6SS de Rhizobium etli bv mimosae Mim12 aislada de nodulos de Mimosa affinis y capaz de nodular ademas Phaseolus vulgaris y Leucaena leucocephala. La cepa Mim1 contiene una agrupacion de 28 genes en el plasmido f no simbiotico, relacionados con la formacion de un T6SS, presentando una organizacion similar a la descrita en Agrobacterium tumefaciens C583 que consiste en dos operones divergentes. Se ha descrito para varios microorganismos que cuando el T6SS esta activo, las proteinas Hcp y VgrG que forman parte del aparato de secrecion pueden detectarse en el medio extracelular3. Los genes que codifican proteinas estructurales en las dos bacterias presentan una gran similitud, asi Hcp muestra un 94% de identidad entre ambas permitiendo que los anticuerpos que detectan Hcp de Agrobacterium3 tambien reaccionen con Hcp de Mim1. Utilizando anticuerpos contra Hcp de Agrobacterium se ha identificado esta proteina en el medio extracelular de cultivos de Mim1 en fase estacionaria y debilmente en fase exponencial. Tambien se ha demostrado su presencia en nodulos de judia y en cultivos crecidos en presencia de exudados de L. leucocephala, P. vulgaris y Pisum sativum. Ademas, con el fin de conocer en que condiciones se activa el T6SS de Mim1, se analizo una region de ADN presumiblemente promotora comprendida entre las dos agrupaciones de genes orientados de forma divergente de Mim1. Esta region se fusiono transcripcionalmente a un gen b-gal delator sin promotor del vector pMP220 en las dos posibles orientaciones, una de las orientaciones (P1) controlaria la expresion de genes como hcp y posibles efectores y la otra (P2) de otros genes estructurales. Los resultados mostraron que ambas orientaciones se expresaban a altas DO600 (0,8-1) aunque los valores de P1 fueron entre dos y tres veces superiores a los de P2. Sin embargo a bajas DO600 (0,1-0,2) la actividad de P1 ser redujo a la mitad y la de P2 a niveles del control sin promotor. Con el objetivo de conocer el papel del T6SS en simbiosis se han realizado 3 mutantes que afectan a genes estructurales del T6SS de Mim1, uno en el gen hcp, otro en tssM y el tercero es una delecion de todos los genes presumiblemente dependientes de P2. Se examino el fenotipo producido en P. vulgaris y L. leucocephala y se observo que los tres mutantes produjeron nodulos blancos y plantas con un porte similar a plantas no inoculadas, con menor tamano que las inoculadas con la cepa parental y con un color mas amarillento. En este trabajo se ha mostrado por primera vez que la presencia de un T6SS en rizobios tiene un efecto beneficioso en la simbiosis con varios hospedadores. En estos momentos se esta trabajando en la caracterizacion de posibles efectores. Referencias. 1. Records AR. 2011 The type VI secretion system: a multipurpose delivery sustem with a phage-like machinery. Mol Plant Microbe Interact 24: 751-757. 2. Rogel MA et al. 2014. Genomic basis of symbiovar mimosae in Rhizobium etli. BMC Genomics 15: 575 3. Wu, HY et al. 2012. Acid-induced type VI secretion system is regulated by ExoR-ChvG/Chvl" @default.
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