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- W55067300 abstract "La Fibrosis Quistica (FQ) es una enfermedad autosomica recesiva producida por mutaciones en el gen que codifica el canal de cloruro CFTR. Mediante la metodologia de “Differential Display” (DD) detectamos que la expresion del gen mitocondrial MTND4 esta regulada negativamente en FQ. MTND4 es un gen que codifica para la subunidad ND4 del Complejo I mitocondrial (CIm). Esta subunidad es fundamental para la correcta actividad del CIm. Nuestro objetivo principal fue determinar si la reduccion de la expresion de MTND4 en FQ induciria una falla en la actividad del CIm. Primero, validamos los resultados del DD mediante RT-PCR semi-cuantitativa en celulas FQ (CFDE) asi como tambien en celulas donde la expresion del CFTR habia sido corregida (CFDE/6RepCFTR) y en celulas CFDE/6RepCFTR tratadas con inhibidores de la actividad del CFTR (glibenclamida y CFTR(inh)- 172). A su vez, medimos la actividad del CIm mediante la tecnica “Blue Native- PAGE”, en mitocondrias extraidas desde diferentes modelos de celulas FQ. Asi, observamos una disminucion significativa de la actividad del CIm en los distintos modelos FQ. Tambien detectamos un aumento en la produccion de especies reactivas de oxigeno (ROS) en celulas FQ, mediante la sonda diacetato de 2’,7’-diclorodihidrofluoresceina (DCFH-DA). Finalmente, medimos el numero de copias de ADN mitocondrial (ADNmt) mediante “Real-Time”-PCR para determinar si existia una disminucion en el numero de copias que pudiese explicar la reduccion de la expresion de MTND4. Sin embargo, no encontramos diferencias significativas entre las celulas FQ y sus controles. Nuestros resultados sugieren que existe una relacion causal entre la falla del CFTR y la disminucion de la expresion de MTND4. Esta disminucion en la expresion de MTND4 esta acompanada de una reduccion en la actividad del CIm y por un aumento en la produccion de ROS, lo que podria tener un rol trascendental en los procesos inflamatorios y apoptoticos observados en FQ, para los cuales no se conocen los mecanismos ni las implicancias fisiopatologicas." @default.
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