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- W577381337 abstract "Ziel der vorliegenden Arbeit war es, verschiedene physiologische Parameter hinsichtlich ihres Einflusses auf die Kolonisierungs- und Plasmidtransfereffizienz von P. chlororaphis SPR044 in der Rhizosphare von A. thaliana zu untersuchen. Zu diesem Zweck wurden TnMod-Insertionsderivate mit Veranderungen Quorum-Sensing-regulierter Funktionen untersucht. Daruber hinaus sollten Auswirkungen von pJP4 auf die Fitness von SPR044 festgestellt werden. Weiterhin sollte eine Strategie zur in situ-Detektion plasmid-tragender Stamme in der Rhizosphare entwickelt werden. Folgende Ergebnisse wurden erhalten:Das naturliche Isolat P. chlororaphis SPR044 produzierte BHSL, 3-OH-OHSL und ein weiteres, bisher nicht identifiziertes Acyl-HSL. Alle drei Acyl-HSLs wurden ebenfalls von den PCN-negativen SPR044-Derivaten sowie vom PCN-Uberproduzierer produziert, nicht jedoch von den Quorum-Sensing-negativen Derivaten.Entsprechend der regulatorischen Funktion der Acyl-HSLs zeigten quantitative Analysen eine Korrelation zwischen der Menge von produzierten Acyl-HSLs, antimikrobiellen Metaboliten und extrazellularen Proteasen. Die einzige Ausnahme bildete der PCN-Uberproduzierer. Dessen PCN-Uberproduktion basiert vermutlich auf einer Veranderung des LPS und nicht auf der Ausschaltung eines negativen Regulators.In Einzelkultivierungs-Experimenten zeigte sich nach 14 Tagen kein Unterschied zwischen den Populationsgrosen des Wildtyps und der Derivate. Nach 28 und 42 Tagen war die Population des Wildtyps gleich gros wie die des PCN-negativen Derivats und signifikant groser als die des gacS-negativen Derivats und des PCN-Uberproduzierers. In Kokultivierungs-Experimenten war die Population des gacS-negativen Derivats hingegen stets gleich gros wie die des Wildtyps. Eine Erklarung dieses Phanomens konnte durch Untersuchung der Wachstumskinetiken in Flussigkultur erbracht werden. Die Quorum-Sensing-negativen Derivate wiesen eine stark verkurzte Lag-Phase und eine reduzierte Produktion des fur die stationare Phase spezifischen Sigmafaktors Rpos auf. Dies fuhrte nach Koinokulation mit anderen Bakterien offenbar zu einer Aufhebung des selektiven Nachteils. Vermutlich nutzen die gacS-negativen Stamme komplexe C-Quellen, die durch die Enzyme des Wildtyps zuganglich gemacht werden und profitieren daruber hinaus von der verkurzten Lag-Phase.Die Frequenz des konjugativen pJP4-Transfers von SPR044 zu R. eutropha ist unabhangig von Quorum-Sensing- und PCN-Produktion.Die Transformation mit pJP4 per se hatte keinen negativen Einfluss auf die Rhizosphare-Kolonisierungseffizienz von SPR044. Lag jedoch zusatzlich abiotischer oder biotischer Stress vor, manifestierte sich die metabolische Last durch pJP4 in einer verringerten Populationsgrose. Dieser Effekt war unabhangig vom Quorum-Sensing-System und der PCN-Produktion von SPR044.VirB5 von A. tumefaciens assembliert in einer hohermolekularen Struktur, die durch Scherkrafte von der Zelle gelost und mittels Ultrazentrifugation sedimentiert werden kann. Bei verschiedenen Reinigungsschritten wurde eine Kofraktionierung mit der Haupt-Piluskomponente VirB2 beobachtet. VirB5 ist somit eine Nebenkomponente des T-Pilus. Das homologe Protein TraC aus dem IncN-Plasmid ubt vermutlich eine ahnliche Funktion in pKM101-determinierten Pili aus. Zellfraktionierung pJP4-tragender P. chlororaphis-Zellen und Detektion mit spezifischen Antiseren deuten darauf hin, dass TrbC und TrbF Haupt- und Nebenkomponente pJP4-determinierter Pili sind. Bei TrbH handelt es sich um ein membran-assoziiertes Lipoprotein. Die Detektion pJP4-tragender Bakterien aus der Rhizosphare war mit den TrbF- und TrbH-spezifischen Antiseren in situ moglich. Das TrbF-spezifische Antiserum ermoglichte die Erkennung IncP-Plasmid-tragender Bakterien. Das TrbH-spezifische Antiserum ermoglichte eine zusatzliche Unterscheidung zwischen IncPa- und IncPs-Plasmid-tragenden Zellen. Eine Kombination der Immunfluoreszenz-Analyse mit FISH erwies sich als geeignet fur die Detektion von pJP4-Transfer zwischen SPR044 und R. eutropha in der Rhizosphare von A. thaliana." @default.
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