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• W600492617 abstract "L’objectif de cette etude consiste a mettre au point, d'une part, les methodes de couches cellulaires minces transversales (CCMt) pour l'induction in vitro des embryons somatiques et la regeneration des plantes ; d'autre part, une methode d'insertion genique par biolistique chez une plante de type C4 photosynthetique de Digitaria sanguinalis (L. ) Scop. Dans la premiere partie sont presentes les effets des differents sucres et auxines ainsi que ceux de differentes conditions d'eclairement sur l'embryogenese somatique directe des CCMt. La conversion des embryons somatiques en plantes necessite un transfert des ccmt embryogenes sur un milieu de regeneration. Une methode prometteuse est presentee dans ce travail. Elle permet d'obtenir directement et rapidement, sur des CCMt, des structures pseudo-embryo/caulinaires (SPEC) avec une grande frequence. Ces structures evoluent en plantes au bout de 3 semaines. Cette methode de regeneration rapide et en une seule etape, presente un grand avantage dans la transformation genetique. Les plantes regenerees avec transfert ou en une seule etape, se developpent et fructifient normalement. La deuxieme partie relate la mise au point des techniques de transformation par biolistique des CCMt en utilisant differentes constructions d'ADN, notamment le promoteur 35S du virus de la mosaique du chou-fleur (CaMV 35S), le promoteur alcool deshydrogenase du mais (Adh) suivi du premier intron (Adh1), le promoteur phosphoenolpyruvate carboxylase du sorgho (PEPC) ; les genes de resistance soit a la kanamycine (gene NPT II), soit au glufosinate (gene BAR) sont utilises comme marqueurs de selection et le gene de la β-glucuronidase (GUS) comme marqueur de visualisation. Des plantes resistantes au glufosinate et au basta ont ete selectionnees (Fo). Des graines issues de Fo ont ete testees pour leur resistance au meme agent de selection : 5 % de plantes resistantes a 3 mg/l de glufosinate ont ete obtenues, alors que 100 % des plantes temoins meurent. Des analyses moleculaires (par Southern) des plantes resistantes supposees transgeniques sont en cours. Ce travail ouvre la voie a l'etude de la regulation in planta de l'expression des genes phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) dans les plantes C4 (Digitaria, Amaranthus)." @default.
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