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• W605572924 abstract "Les bacteries sont capables de s’adapter rapidement aux changements de l’environnement grâce a une regulation concertee de differents processus cellulaires comme la transcription, la replication de l’ADN et la division cellulaire. Dans des conditions ou la disponibilite en nutriments permet aux bacteries de pousser rapidement et donc de completer un cycle cellulaire en un temps inferieur a 60 minutes, la vitesse de replication de l’ADN augmente grâce a la presence de plusieurs fourches de replication qui engendrent la superposition de plusieurs cycles de replication de l’ADN. Ce processus requiert la synchronisation du moment de l'initiation de la replication aux differentes origines au fur et a mesure que le nombre d’origines augmente, et ce afin de maintenir la stabilite genomique. La proteine DnaA joue un role fondamental dans la regulation de ces parametres en fonction des changements de l’environnement. L’expression du gene DnaA est connue pour etre dependante de la vitesse de croissance. Elle est egalement soumise a une autoregulation negative. Cependant, le role precis de cette regulation sous des conditions normales de croissance n’est pas encore completement clarifie. Dans ce travail, j’ai caracterise de facon quantitative la regulation de la transcription de dnaA en fonction de la phase, de la vitesse, et de la temperature de croissance des bacteries, afin d’obtenir une description precise d’un des principaux reseaux regulateurs importants pour maintenir l’integrite du genome des bacteries. La mesure in vitro des constantes d’affinites de la proteine DnaA pour ses sites de fixation sur son propre promoteur grâce a la technique des empreintes a la DNase I a permis la caracterisation de mutations specifiques de ces sites. Ces mutants ont ensuite ete utilises pour mesurer in vivo les changements d’activite du promoteur grâce au suivi en temps reel de l’expression du gene rapporteur gfp en fonction de differents parametres de croissance. Les resultats montrent que l’expression de dnaA est regulee non seulement negativement mais egalement positivement, et que l’autoregulation est independante de la vitesse et de la temperature de croissance des bacteries. Par contre, la fixation de la proteine DnaA sur l'ADN est dependante de la temperature de facon non-lineaire. Des changements conformationnels de la proteine sont donc probablement necessaires pour la reconnaissance de ses sites de fixation. Cependant, la dependance a la temperature de l'activite de DnaA-ATP suggere que l’augmentation de titration de la proteine aux differents sites disperses sur le genome peut contrebalancer l’induction de son expression a basse temperature necessaire pour activer l'origine de replication. Dans ce travail je montre egalement que bien que des similarites existent entre la region regulatrice de dnaA et les promoteurs ribosomaux, l’expression de dnaA est assez differente de celle du promoteur ribosomal rpmH qui se trouve en position divergente sur la meme region du chromosome. A des vitesses de croissance qui permettent de completer un cycle cellulaire en un temps inferieur a 60 minutes, c'est a dire lorsque plusieurs cycles de replication se chevauchent, l’expression de dnaA augment en fonction de la vitesse de croissance de maniere proportionnelle a la vitesse de replication de l’ADN et independante de sa propre autoregulation. Enfin, je me suis interessee a la regulation de l’initiation de la replication de l’ADN, au role de DnaA, et a son mecanisme de regulation transcriptionnelle chez d’autres especes bacteriennes. La diversite de ces mecanismes reflete les differentes conditions de vie et comportements des microorganismes. L’element commun est la proteine DnaA, dont l’organisation du gene et les fonctions ont ete bien conservees au cours de l’evolution. La fixation de l’ATP a DnaA et son hydrolyse representent clairement un facteur cle universel qui regule l’initiation de la replication de l'ADN, alors que les proteines accessoires impliquees dans ce processus varient d'un organisme a l'autre. Cependant, et de maniere generale, les bacteries qui appartiennent au meme phylum possedent le meme groupe de proteines regulatrices" @default.
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