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- W7656031 abstract "L'objet de cette these est de faire une synthese sur les connaissances des differents mecanismes transcriptionnels, de la mise en place de la differenciation jusqu'au maintien de la specificite d'expression des genes hepatiques et adipocytaires. Certains de ces mecanismes ont ete etudies a travers deux systemes modeles: l'expression transcriptionnelle du gene codant pour la pyruvate kinase hepatique (pk-l) et un nouveau complexe proteique se liant au promoteur du gene codant pour la ccaat/enhancer dna binding protein alpha (c/ebpalpha). Dans un premier temps, afin d'etudier les mecanismes moleculaires impliques dans la specificite d'expression du gene de la pk-l de rat et son controle par l'etat nutritionnel et hormonal, j'ai clone le gene codant pour cette enzyme. Apres avoir caracterise sa structure et son organisation, j'ai mis en evidence les sequences activatrices et inhibitrices responsables de l'expression hepatique de la pk-l par transfection de cultures primaires d'hepatocytes et de lignees de cellules hepatiques et non hepatiques. J'ai ensuite participe a la caracterisation de ces regions regulatrices par transgenese demontrant ainsi que les memes sequences identifiees ex vivo etaient responsables de la specificite d'expression de ce gene in vivo. De plus, nos premiers resultats ont permis de delimiter les regions responsables de la reponse hormonale et nutritionnelle. Dans un second temps, j'ai etudie les mecanismes de l'expression du gene codant pour c/ebp alpha. Au cours de la differenciation des cellules preadipocytaires 3t3-l1 en adipocytes, la transcription du gene de c/ebpalpha est activee. J'ai mis en evidence au sein du promoteur de ce gene la presence d'une sequence composee de 2 sites adjacents qui lient d'une part un nouveau facteur, cup (c/ebpalpha undifferentiated protein) et d'autre part une proteine de la famille sp1 (sp1'). La fixation de cup sur son site est fortement potentialisee par l'interaction de cup avec sp1'. J'ai hautement enrichi l'activite de cup par chromatographie d'affinite a partir d'extraits nucleaires de cellules hela et montre que cup est probablement compose d'au moins 2 differentes sous-unites. Parallelement, j'ai montre qu'il existe un profil d'expression reciproque de cup et de c/ebpalpha dans differents types de lignees cellulaires et tissus: par exemple, au cours de la differenciation des preadipocytes 3t3-l1 en adipocytes, l'activite de cup disparait alors que l'expression de c/ebpalpha augmente" @default.
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