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- W8055319 abstract "Les amines biogenes sont des composes allergenes, notamment rencontres dans les produits fermentes tel que le vin. Les bacteries lactiques du vin, dont Oenococcus oeni, le principal acteur de la fermentation malolactique, sont capables de produire ces molecules, a partir de precurseurs azotes. Afin de reduire la teneur en amines biogenes, il est necessaire de comprendre le role de cette production, chez les souches impliquees dans la synthese de ces metabolites. Le projet europeen BiamFood FP7 (n°211441) a ete mis en place pour repondre a cette problematique. Au cours de mon travail de these, des outils moleculaires ont ete developpes afin de muter de maniere ciblee les genes de O. oeni et d’exprimer des genes d’interet. Ainsi, les clusters hdc de Lactobacillus hilgardii et odc de O. oeni, responsables respectivement de la synthese de l’histamine et de la putrescine, ont ete clones dans le vecteur pGID052 et transferes dans la souche de laboratoire O. oeni ATCC BAA-1163, deficiente pour la production d’amines biogenes. Cette strategie n’ayant pas donnee lieu a la production d’amine biogene, mon travail de recherche s’est oriente vers la caracterisation biochimique de l’ornithine decarboxylase de O. oeni. L’ornithine decarboxylase de O. oeni BR14/97 a ete sur-produite chez E. coli via le systeme pET. Apres purification de l’enzyme, le pH optimal et la temperature optimale de fonctionnement, 5,5 et 35°C respectivement, ont ete caracterises. Les constantes cinetiques Km = 1 mM et Vmax = 0,57 U. mg-1 ont egalement ete determinees en mesurant la putrescine produite par HPLC (Gomez-Alonso et al, 2007). De plus, l’ODC de O. oeni BR14/97 est specifique de la L-ornithine et ne peut pas degrader la L-lysine en cadaverine, ce qui implique la presence d’une voie metabolique propre a la production de cadaverine chez cette souche. Dans un second axe du projet, l’influence de la source azotee et notamment des peptides versus acides amines libres, a ete etudiee chez une souche de Lactobacillus plantarum, isolee du vin et productrice de tyramine. Les peptides contenant de la tyrosine, sont utilises par cette souche pour former de la tyramine. La production augmente en phase stationnaire de croissance, et est correlee a l’expression du transporteur tyrP. L’analyse de la tyrosine presente dans le milieu de culture montre que ces peptides seraient degrades dans le milieu extracellulaire chez L. plantarum." @default.
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