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- W825570003 abstract "La voie endo-lysosomale dirige les recepteurs membranaires vers le processus de degradation lysosomale. En bref, les recepteurs sont marques par l'ubiquitine, envoyes vers les endosomes precoces puis, pris en charge pas le systeme ESCRT (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) et integres dans des vesicules intraluminales. Ce systeme est compose des complexes ESCRT-0, I, II, II et VPS4. Certaines proteines ESCRT sont aussi recrutees lors de processus topologiquement similaires comme la cytokinese ou le bourgeonnment viral de certains virus enveloppes. AMSH (Associated Molecule of the SH3 domain of STAM) est une ubiquitine-hydrolase associee au systeme ESCRT qui hydrolyse les chaines d'ubiquitine liees par leur lysine K63. Elle interagit directement avec ESCRT-0 via la sous-unite STAM et avec les membres CHMP1A, 1B et 3 d'ESCRT-III. Bien qu'AMSH pourait recruter ces proteines ESCRT ou etre elle-meme recrutee par celles-ci, le mecanisme d'activation de son activite d'hydrolase est encore meconnu. Afin de mieux comprendre les bases structurales de l'activation d'AMSH, j'ai essaye danalyser des formes recombinantes de cette proteine par cristallographie aux rayons X et par diffusion des rayons X aux petits angles (SAXS) ce qui m'a permis d'obtenir deux modeles a basse resolution. De plus, j'ai caracterise par SPR (Surface Plasmon Resonance) les interactions entre AMSH et CHMP1A, 1B et 3 et determine les residus clefs du dernier complexe. Cela a montre que les surfaces d'interaction employees par le domaine MIT d'AMSH ne sont pas les memes pour CHMP3 et CHMP1A/1B. J'ai aussi decouvert que l'activite enzymatique d'AMSH seule est tres faible ce qui impliquerait une auto-inhibition en solution. L'hydrolyse des chaines d'ubiquitine liees par leur lysine K63 pourrait alors etre activee par une construction de STAM comprenant le domaine SH3 ainsi que les domaines liant l'ubiquitine VHS et/ou UIM." @default.
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