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• W84893307 abstract "La actual investigacion en el campo de las celulas madre esta ofreciendo nuevas posibilidades de terapia para enfermedades incurables del sistema nervioso, como es el caso de la corea de Huntington. Esta es una enfermedad hereditaria caracterizada por una degeneracion selectiva de las neuronas GABAergicas del Nucleo Estriado. Para poder desarrollar terapias de reemplazo celular basadas en los transplantes de celulas madre es necesario controlar el proceso de diferenciacion de las celulas madre hacia el fenotipo neuronal GABAergico.En la presente tesis hemos estudiado los mecanismos de supervivencia de las celulas madre en cultivo y los factores implicados en la diferenciacion selectiva hacia el fenotipo GABAergico. Hemos desarrollado un protocolo de diferenciacion in vitro basado en la adicion secuencial de acido retinoico (RA) y cloruro potasico (KCl). El RA promueve la supervivencia celular e induce un fenotipo neuronal. El tratamiento con KCl induce selectivamente el fenotipo GABAergico. Mediante este procedimiento se generan un elevado numero de neuronas GABAergicas maduras, post-mitoticas y funcionales, de forma eficaz y homogenea, a partir de una linea de celulas madre en cultivo.El transplante de estas celulas pre-diferenciadas in vitro en el cerebro adulto de rata y en un modelo excitotoxico de la enfermedad de Huntington demuestran un buen grado de diferenciacion, supervivencia e integracion funcional. Las celulas muestran una supervivencia a largo plazo, conservan el fenotipo neuronal GABAergico y elaboran procesos neuriticos asociados a posibles contactos pre- y post-sinapticos.Estos resultados apoyan la posibilidad de desarrollar terapias celulares basadas en la diferenciacion de celulas madre para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.SUMMARY:CELL THERAPY IN MODELS OF HUNTINGTON'S DISEASEThe implementation of cell replacement therapies for Huntingtons disease using multipotent neural stem cells requires the specific differentiation into gamma-aminobutyric acid (GABA) neuronal subtype prior to transplantation. In the present thesis we present an efficient culture procedure that induces stable GABAergic neurons from the immortalized striatal neural stem cell line ST14A. This process requires sequential retinoic acid treatment and KCl depolarization. Initial addition of retinoic acid increased cell survival and promoted neuronal differentiation. Subsequent stimulation with KCl induced specific differentiation into GABAergic neurons, yielding 74% of total cultured cells. KCl-evoked Ca2+ influx reduced cell proliferation and nestin expression, and induced neurite outgrowth and GABAergic markers as well as GABA contents, release and uptake.Characterization of the integration, survival and phenotype of these pre differentiated GABAergic neurons following transplantation into the adult brain in a model of Huntington's disease revealed long-term survival in quinolinate-lesioned striata. Under these conditions, cells maintained their GABAergic phenotype and elaborated neurite processes with synaptic contacts with endogenous neurons.We present an in vitro procedure that generates a homogeneous population of functional GABAergic neurons from a neural stem cell line, which survive and maintain their acquired fate in vivo. This data may lend support to the possibility of cell replacement therapies for Huntingtons disease using neural stem cells. " @default.
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