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• W971524174 abstract "A anemia falciforme (AF) e causada pela substituicao de uma unica base no codon 6 do gene da globina beta (GAG - GTG), levando a producao de hemoglobina S. Estudos recentes tem mostrado que a ativacao de guanilato ciclase (GCs) em linhagens de celulas eritrociticas e em cultura primaria de precursores da serie vermelha, causa um aumento na transcricao do gene gama globina e consequentemente aumento na producao de hemoglobina fetal (Hb F) (Ikuta et al., 2001). Os nucleotideos ciclicos, AMPc e GMPc sao segundos mensageiros responsaveis por varios sinais extracelulares, incluindo hormonios e neurotransmissores e provavelmente tem papel importante na anemia falciforme regulando a producao de HbF. Este trabalho teve como objetivo, primeiramente, estabelecer um sistema de cultura de celulas CD 34+ e posteriormente investigar a existencia de uma via NO-GMPc/AMPc envolvida na producao de Hb F nos eritrocitos de pacientes com anemia falciforme e verificar se haveria aumento da expressao de GCs e de gama globina nestes mesmos pacientes. Amostras de sangue foram coletadas de voluntarios sadios e pacientes com anemia falciforme. Foi utilizado cultura de celulas CD34+ hematopoeticas de sangue periferico, e ao longo da diferenciacao eritroide (7°, 10° e 13° dia) foram coletadas celulas para citometria de fluxo, citospin, dosagem de GMPc e AMPc e avaliacao da expressao genica de gama globina, GCs alfa e beta subunidades, eNOS, PDE3B, CD36, CD29B e CD49. Observamos que gama globina encontra-se significativamente mais expressa nas culturas falciformes no 13° dia de diferenciacao eritroide em relacao ao mesmo ponto das culturas controle (2,945 ± 0,303 x 1,445 ± 0,165, respectivamente ,p=0,0095, n=6). A expressao de GCs alfa e beta subunidades, eNOS, PDE3B, CD36, CD29B e CD49 nao apresentou diferencas significativas durante a diferenciacao eritroide nas culturas falciformes e controles. Os niveis de GMPc nas culturas de pacientes com anemia falciforme estavam significativamente diminuidos ao longo da eritropoese in vitro em comparacao com as culturas controles (dia 7: 0,2765 ± 0,0527 x 0,639 ± 0,1221 (p=0,0260); dia 10: 0,1166 ± 0,0219 x 0,268 ± 0,1181; dia 13: 0,037 ± 0,0061 x 0,093 ± 0,0236 (p=0,0152), respectivamente), enquanto o AMPc, encontrava-se elevado no dia 7 das culturas falciformes em relacao as culturas controles (dia 7: 72,017 ± 14,849 x 24,987 ± 13,497 (p=0,048); dia 10: 36,3384 ± 16,708 x 8,663 ± 4,591; dia 13: 1,7138 ± 1,093 x 0,680 ± 0,370, respectivamente). O tratamento com BAY 41-2272 (ativador de GCs) em unica cultura controle aumentou aproximadamente 3x os niveis de gama globina apos 72 h de incubacao. Nossos resultados sugerem que as celulas tronco hematopoeticas dos pacientes com AF sao diferentes as dos controles, uma vez que ambas, sob as mesmas condicoes in vitro expressaram niveis significativamente diferentes de gama globina. Um cross talk entre o GMPc e o AMPc poderia regular a expressao de gama globina ao longo da diferenciacao eritroide. Estes dados resultam no primeiro trabalho a demonstrar a expressao basal de gama globina ao longo da diferenciacao eritroide de pacientes com anemia falciforme. Desta maneira, o esclarecimento desta via pode contribuir com entendimento da fisiopatologia da anemia falciforme e identificar novos alvos para a regulacao farmacologica de hemoglobina fetal.Abstract" @default.
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